飼料中孔雀石綠的分析測定（一）

圖1.  50μg/ml 2種孔雀石綠及其氘代物色譜圖。

本文建立了SPE-LCMS/MS測定粕類等植物源飼料中孔雀石綠的檢測方法。用乙腈結合基質分散固相萃取，提取液經蒸干濃縮后用中性氧化鋁和陽離子交換固相萃取柱凈化, 使用HPLC-MS/MS進行檢測，方法滿足粕類等植物源飼料中孔雀石綠的檢測需求。

孔雀石綠是一種三苯甲烷類染料，被廣泛用于預防與治療各類水產動物的水霉病、鰓霉病和小瓜蟲病等。孔雀石綠具有高殘留和致癌、致畸、致突變等副作用，鑒于其危害性，加拿大于1992年就禁止將其作為漁場殺菌劑，加拿大和美國均規定在食用水產品中禁止檢出孔雀石綠和無色孔雀石綠。歐盟于2002年6月也頒布法令禁止在漁場中使用孔雀石綠。我國于2002年5月將孔雀石綠列入《食品動物禁用的獸藥及其化合物清單》，并在2004年后出臺了一些針對水產品中孔雀石綠的檢測方法。2009年我國農業部也頒布了飼料中有關孔雀石綠及其代謝物的檢測標準，飼料作為動物的食物來源也被納入了孔雀石綠檢測項目之中，主要針對的飼料品種為于配合飼料、濃縮飼料、添加劑預混合飼料、魚粉等。2011年在對一些進口豆粕、菜籽粕類產品質量安全情況進行監督檢測時，多次發現從印度進口的粕類產品含有孔雀石綠和無色孔雀石綠。粕類是動物飼料生產的重要原料，是保證動物健康和動物安全衛生的關鍵，粕類產品中檢出孔雀石綠的現象應當引起高度重視。據了解，粕類中加入孔雀石綠具有防霉、防蟲的作用，因此不排除人為蓄意添加的可能。因此本文的工作目的是為了更新國家標準方法，建立粕類飼料中孔雀石綠檢測的方法。

圖2.  MG子離子掃描圖。

儀器與試劑

高效液相色譜串聯質譜儀：配電噴霧（ESI）離子源。安捷倫Vac Elut SPS 24 固相萃取裝置，安捷倫Bond Elut AL-N 500mg，3ml和Bond Elut PRS 500mg，3ml強陽離子交換固相萃取小柱。

圖3.  LMG子離子掃描圖。

Bond ElutBondesil AL-N散裝中性氧化鋁，孔雀石綠草酸鹽標準品：純度≥95％。乙腈和甲酸為色譜純，甲酸為優級純，其余試劑均為分析純， 實驗室用一級水由Millipore milli-Q超系統制備。

圖4.  內標D6-LMG子離子掃描圖。

實驗方法

儀器條件

液相色譜條件 參考原飼料中孔雀石綠檢測標準《NY/T 1756-2009》提供的色譜條件：色譜柱為C18柱（150 mm×2.1mm，3.5μm）；流動相為0.1％甲酸溶液+乙腈=22+78（v+v）；流速0.25ml/min；柱溫50℃；進樣量20μl。

圖5.  內標D5-MG子離子掃描圖。

質譜條件 離子源：電噴霧ESI 離子源；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應監測；霧化氣、錐孔氣均為高純氮氣；碰撞氣為高純氦氣。使用前調節各氣體流量，以使質譜靈敏度達到檢測要求，噴霧電壓、碰撞能等電壓值應優化至最優靈敏度，質譜條件見表1。

圖6.  孔雀石綠和無色孔雀石綠的線性關系圖。