關于分離外泌體的最佳方法，仍然眾說紛紜，尚無定論。在諸多方法中，尺寸排除色譜法（size exclusion chromatography，SEC)因可分離得到高純度和濃縮的樣本，被廣泛用來分離生物液體樣本。SEC可通過離心或重力流進行。在重力流的作用下，一個樣本可以收集到多組分離組分，并可分析得到高純度外泌體。
技術介紹
Exo-spin?技術結合了沉淀法和SEC法，沉淀劑可以從樣本中將外泌體富集出來，但是只使用沉淀劑方法，會導致外泌體和雜蛋白等雜質一起沉降，結合SEC純化管柱，可去除蛋白等雜質，大大提高了外泌體純度。
1.SEC原理介紹
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SEC方法是一種根據尺寸大小分離溶液中顆粒的方法。色譜柱中裝有穩定的聚合物珠（樹脂），形成多孔基質。當將含有外泌體的溶液添加到SEC色譜柱中時，較小的顆粒將被捕獲在孔中，而較大的顆粒則不會進入孔中并先洗脫。因此，不同階段的洗脫液中會包含不同大小的顆粒，首先是大顆粒，其次是小顆粒。SEC方法是獲得高純度樣品的理想方法，可以將外泌體與其他非外泌體成分分開，同時適用于大體積和小體積的起始樣本。 |
2.Exo-spin技術操作步驟
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1. 離心去除細胞和細胞碎片 2. 沉淀含有外泌體的部分（血液樣本（血漿和血清）無需此步驟） 3. 將含外泌體的沉淀物添加到Exo-spin?mini-HD色譜柱中，以進行SEC純化。 |
從人血清提取外泌體效果驗證
方法：
將100 μl人血清樣品添加到Exo-spin?mini-HD色譜柱中，然后添加100 μl PBS，并重復添加23次200 μl PBS，直至收集24次200 μl分離組分，分別檢測24個組分的外泌體顆粒（下圖藍色曲線）和蛋白濃度（下圖灰色曲線）。
結果分析：
使用Exo-spin?mini-HD的人血清分離譜
分離組分分析：
組分1-5，Exo-spin?mini-HD色譜柱未洗脫出外泌體，組分6和7包含外泌體，其中外泌體濃度在組分7中達到峰值，而且這兩個組分中的蛋白質含量仍偏低。不需要的雜蛋白體積較小，則在隨后洗出。
總結：
使用Exo-spin?mini-HD可以高效分離外泌體，用于分離從1到75 ml（細胞培養基，尿液，唾液，CSF和任何其他低蛋白生物液體）的起始樣品和從1到150 μl血液樣品（血清/血漿）。
Exo-spin?mini-HD是通過重力流的方式收獲外泌體，因此也無需特殊設備，操作更簡單。