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  • 發布時間:2021-02-23 11:28 原文鏈接: 高效的單細胞打印技術加速穩定細胞系的開發

    目前,在單抗制藥領域,需要穩定高產的細胞株,用于下游的抗體穩定生產,因為穩定高產的細胞株不僅可以簡化下游純化工藝,還可以降低整個生產工藝的成本,確保高品質產品的獲得,以應對復雜的臨床應用和市場競爭環境。



    Fig.1 細胞株構建經典流程


    傳統的細胞系開發的單細胞分離技術存在很多缺陷,如分離效率低,細胞存活率低等。由德國cytena公司開發的ZL的單細胞打印技術(SCP technology),通過將單個細胞自動分離到標準的96孔板/384孔板中,大大加速抗體細胞株的開發且適用于各種細胞類型。

    圖片

    Fig.2 SCP


    自推廣以來,SCP單細胞打印機不負眾望,深受廣大客戶的喜愛,獲得一致好評,全國范圍內的demo預約也是絡繹不絕,諸如藥明康德、信達生物、君實生物、齊魯制藥、昭衍生物、邁百瑞、杭州養生堂、麗珠生物、復宏漢霖、宜明昂科、澤璟生物、皓陽生物和三優生物等幾十家中國知名制藥企業在demo成功后都紛紛購買設備。在艾貝泰和客戶的努力下,有的制藥企業僅一個月時間便實現了儀器從demo試用到設備安裝,從培訓到最終投入使用,大大縮短了細胞株開發的時間。


    應用案例展示
     

    SCP和有限稀釋(LD)分選單細胞的效率對比
     

    為了評估SCP分選單細胞的效率,我們在用SCP分選細胞后,在day0天統計了單細胞的比例,并連續跟蹤細胞的生長,在14天時分析了單細胞生長起來的克隆率。
     

    圖片

    Fig.3 比較SCP與LD的單細胞接種效率


    為了避免周邊孔的蒸發影響細胞的生長,我們只分選了96孔的中間60個孔。如圖3所示,SCP實現了高效的單細胞接種效率。兩個細胞和零個細胞發生的比例非常低。每塊 96 孔板的平均分選時間為3-5分鐘。經SCP分選的每塊孔板中單細胞率和單克隆生長孔數顯著優于有限稀釋法。不管是單細胞率還是克隆生長率,SCP都是LCD的 3-4 倍,這意味著有更多的單克隆用于后續的高產細胞株篩選。


    克隆成活率
     

    在同樣的細胞株和培養基條件下,我們比較了SCP和LD的單細胞克隆成活率。
     

    圖片

    Fig.4 比較SCP與LD的單克隆孔數


    左上圖為經SCP分選一塊96孔板在第 14 天的克隆團圖像,一共有70個單細胞克隆孔。相對地,右上圖為LD處理的微孔板,其中有27個孔生長出克隆團,有7個孔中含有明顯的兩個細胞團,只有20個孔是單細胞克隆孔。計算每個孔內的克隆數目并分成 3 類:空孔,單個克隆的孔以及多個克隆的孔。我們觀察到SCP可以產生 73.7% 的單克隆孔(另外有 0% 的孔含多個克隆,26.3%的孔沒有克隆)。同時,我們發現LD可以獲得20%的單克隆孔(另外 70.5% 的孔沒有克隆,9.5%的孔含多個克隆)。
     

    類似的案例還有很多,就不在此一一列舉。大家一致好評的是單細胞打印機分選快速,操作簡單,單克隆生長率是手動分離的3-4倍。
     



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