高效毛細管凝膠電泳儀(CGE)是20世紀80年代后期發展起來的毛細管電泳分離模式。它是將凝膠電泳儀對生物大分子的高效分離能力與毛細管電泳儀的快速、微量和定量分析相結合,是當今分離度極高的一種分離技術。
一、工作原理:
將聚丙烯酰胺等在毛細管中交聯生成凝膠,以凝膠作為載體進行電泳,凝膠具有多孔性,類似分子篩的作用,樣品分子按大小分離。
二、凝膠類型:
1、無機凝膠:
(1)多孔硅膠。
(2)多孔玻璃。
2、有機凝膠:
(1)聚丙烯酰胺。
(2)瓊脂糖。
三、凝膠柱制備:
CGE的關鍵是凝膠柱的制備,常用聚丙烯酰胺凝膠進行DNA片段分析和測序。測定蛋白質和肽的分子量常用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺電泳(SDS-PAGE)。
將單體丙烯酰胺溶液中的交聯劑N,N′-甲叉雙丙烯酰胺(Bis)的濃度降為零,得到低粘度線性非交聯的親水性聚合物用作操作溶液,來代替高粘度交聯聚丙烯酰胺,仍有按分子大小分離的作用。無膠篩分柱易制備,使用方便,但分離能力比凝膠柱差。
四、特點:
1、抗對流性好,散熱性好,分離度極高。
2、能有效減小組分擴散,峰形尖銳。
五、應用:
蛋白質和DNA等的荷質比與分子大小無關,CZE分離模式很難分離,采用CGE能獲得良好分離。
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