高效液相色譜柱的系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相) 內, 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數, 在兩相中作相對運動時, 經過反復多次的吸附- 解吸的分配過程, 各組分在移動速度上產生較大的差別, 被分離成單個組分依次從柱內流出, 通過檢測器時, 樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來。
高效液相色譜柱故障排除
1、柱壓過高
可能是微粒堵塞，柱床膨脹不可逆吸附，細菌生長等造成的。也有可能是系統反壓問題，例如阻尼器堵塞，進樣器堵塞， 管路或連接口堵塞． 在線過濾器不干凈， 壓力傳感器不準確等。
2、重復性差、不出峰、回收率低可能是色譜柱被污染， 流動相 p H值或者組成不合適造成固定相損失 ， 樣 品溶劑 不同或樣品本身不穩定， 固定 相極性過強或者流動相極性過弱． 或者發生非特異性吸附。也可能梯度實驗時平衡時間不足，溫度波動， 流動相組成改變， 樣品溶劑不同，樣品穩定性不好，方法的開發不好，緩沖液的酸堿度不合適或者緩沖能力不足。
3、柱效低
可能是色譜柱被污染、 過濾片部分堵塞、色譜柱內的死體積造成，例如流動相p H值或者組成不合適造成固定相損失。 流動相急劇變化造成固定相物理損壞， 機械振動造成固定相產生裂縫，柱床收縮或干枯。也有可能是儀器連接的問題， 認真檢查進樣器、檢測器、 管路、 保護柱和在線過濾器等是否連接好，也可能是色譜柱沒有平衡好， 進樣量過大等問題
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