1、范圍
本標準適用于食品中蘇丹紅染料。
本標準規定了食品中蘇丹紅I、蘇丹紅II、蘇丹紅III、蘇丹紅IV的高效液相色譜測定方法。
該方法的檢測限：蘇丹紅i、蘇丹紅ii、蘇丹紅iii、蘇丹紅iv均為10微克/千克。
2、術語和定義
蘇丹紅：屬于偶氮系列化學合成染料。
3、方法要點
樣品萃取用溶劑，固相萃取純化通過反相HPLC - 紫外可見檢測器色譜分析，使用外標。
4、試劑與標準品
乙腈 色譜純
丙酮 色譜純、分析純
甲酸 分析純
乙醚 分析純
正己烷 分析純
無水硫酸鈉 分析純
柱管：1厘米（內徑）x 5厘米（高）注射管。
用于色譜法的氧化鋁（中性100～200階）：在105°c下干燥2h，在干燥器中冷卻至室溫，每100g加2毫升水，混合密封，并放入12h供使用。
氧化鋁色譜柱：在色譜柱管底部插入一薄層脫脂棉。將處理后的氧化鋁裝入處理后的氧化鋁中，使其高度達到3cm。輕壓實后，加入一層薄薄的脫脂棉，用10毫升正己烷洗滌，柱內用雜質洗滌，備用。
5％丙酮的己烷溶液：用正己烷吸入容積至1L 50ml丙酮。
標準物質：蘇丹紅I、蘇丹紅II、蘇丹紅III、蘇丹紅IV；純度（>95%）
標準儲液：蘇丹紅i、蘇丹紅ii、蘇丹紅iii和蘇丹紅iv。0mg（轉化為實際含量），溶于乙醚并以正己烷設定容量至250毫升。
5、儀器與設備
高效液相色譜（配有紫外和可見光檢測器）
分析天平：0.1mg的量感
旋轉蒸發儀
均質機
離心機
0.45μm有機濾膜
6、樣品制備
將液體和泥漿樣品混合均勻，并研磨固體樣品。
操作方法
樣品處理
紅辣椒粉等粉狀樣品
稱為1g~5g（精確到0。001g）樣品加入三角瓶中，10ml～30ml正己烷，超聲波5分鐘，過濾，用10ml正己烷多次清洗殘渣，洗脫無色，與正己烷液體融合。使用旋轉蒸發器濃縮至5ml以下，并緩慢加入氧化鋁色譜柱為了確保色譜效果，在柱中保持n-己烷液體水平約2mm色譜柱不得在整個色譜過程中干燥。用少量正己烷洗脫濃縮瓶并注入層析柱中。控制氧化鋁表面吸附染料的帶寬應小于05厘米，流出物是完全液體樣品，該樣品取決于油通過洗滌塔10毫升?30毫升己烷多少雜質，直到流出物是無色的，己烷淋浴所有丟棄洗劑，將含有60毫升5％丙酮的己烷溶液洗脫，收集并濃縮，并用丙酮轉移到5毫升稀釋，被測有機0.45μm的膜過濾器后。辣椒油、火鍋、黃油等油性樣品0。5g~2g（精確到0。001g）將樣品加入小杯中，并加入適量的己烷溶解（約1毫升至10毫升）。不可溶樣品可以熱溶解在己烷中。按7。1.1“過濾后慢慢加入氧化鋁柱進行測試”操作水分含量高的樣品，如辣椒醬、番茄醬等。
稱取10克?20克（精確到001克）樣品中的離心管中，分散成糊狀的溶液中加入10毫升?20毫升的水，含有更多的水增稠劑樣品中，加入30毫升正 - 己烷：丙酮= 3：1均質化5MI? ，3000rpm下離心10mi n，n-二己烷吸收層，加入下層20毫升×己烷勻漿，離心，將合并的己烷三次，用無水硫酸鈉干燥，加入5克干燥，過濾后旋轉蒸發蒸發至干2倍和用于在儀器上保持5分鐘后，將殘余物溶于5毫升己烷，1.1在按7“被緩慢地加入到氧化鋁柱測試??過濾”操作。
香腸等肉制品
將壓碎的樣品在三角瓶中稱取10g至20g（精確至0.01g），加入60ml正己烷使樣品均勻化5min，濾出濾液，再用20ml×2倍正己烷均勻化過濾。合并三次濾液，加入5g無水硫酸鈉脫水，過濾后在旋轉蒸發器上蒸至5ml以下。按7.1.1“緩慢充入氧化鋁塔，等待測試”操作。
推薦色譜條件
儀器條件
譜柱：c18 3.5μm 4。6毫米x150毫米
流動相：
水溶液A≥0.1%甲酸：乙腈=85：15..
B：乙腈中的0.1％甲酸：丙酮= 80：20
梯度洗脫：
流速:1mL/min
柱溫：30℃
檢測波長：蘇丹紅I 478nm；蘇丹紅II、蘇丹紅III、蘇丹紅IV 520nm；蘇丹紅I峰后切換。
進樣量 10μl 。
標準曲線
排放標準儲備0，0。1,0.2,0.4,0.8,1.6ml，將正己烷設置為25ml的容量，此標準級數濃度為0,0。16,0.32、0.64,1.28、2.56μg/ml，繪制標準曲線。
計算
根據式(1)計算蘇丹紅含量
R=C × V / M
的R - 在每千克毫克（mg / kg）的蘇丹紅內容;
c從標準曲線獲得的樣品溶液中蘇丹紅的濃度，單位為微克每毫升（ug/ml）；
v樣本量，單位：ml(ml)；
M樣品質量(克(G)