食品容器和包裝材料增塑劑包括鄰苯二甲酸 酯類(PAEs)、己二酸酯類(AEs)等。增塑劑與塑料 間并沒有嚴密的化學結合鍵,故很容易進入環境。 近年的研究表明: PAEs和AEs在體內長期累積, 可致畸、致癌和致突變[1,2]。因此,增塑劑的分析 檢測受到重視,尤以PAEs為研究對象居多。 目前, PAEs的檢測技術主要采用薄層色譜 法[3]、氣相色譜法[4~6]、液相色譜法[7~14]、氣-質聯 用法[15,16],樣品處理技術主要有液-液萃 取[3,8,14,15]、固相萃取[4,5,9,11,16]以及固相微萃 取[6,7,12,15]等,涉及的基體主要為PVC塑料[3,4,6,15]、 環境樣品(如水、泥土)[5,8,13,16]、組織和血 漿[7,8,10,15]、食品[12,14]等。食品因直接被攝入而危 害更大,報道過的研究對象主要包括:水產品、牛 奶、食用油等。肉制食品的脂肪含量高, PAEs在 其中的溶出程度尤為嚴重,但至今未見相關檢測 方法報道。
本文以鄰苯二甲酸二乙酯 (DEP)、鄰苯二甲酸 正二丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸正二辛酯(DOP)、鄰 苯二甲酸丁基芐基酯(BBP)、鄰苯二甲酸(2-乙基 己基)酯(DEHP)等5種PAEs為研究對象,建立了 高效液相色譜法測定肉制食品中PAEs的方法。方 法重現性好,準確度高,可用于肉制食品中此類 物質的測定,也可用于生產企業的質量控制。
1 實驗部分
1.1 儀器與試劑
戴安P680C高效液相色譜儀,包括: P680型 四元梯度泵, TCC-100型柱溫箱, ASI-100型自動 進樣器, UVD 170U型紫外檢測器, Chromeleon色 譜工作站; AB104-N型電子天平; XHF-D型高速分 散器; SK-1型渦旋混勻器; DS180A型超聲波清洗 機; Heraeus Primo R高速冷凍離心機; D10-12型氮 氣吹掃儀; Heal Force PW超純水系統。 DEP、DBP、DEHP、DOP標準品( Sigma- Aldrich), BBP標準品(TCI),乙腈(HPLC級)、正己 烷(Fisher),水為超純水。
1.2 色譜條件
色譜柱: Phenomenex Luna C18柱(250 mm×4.6 mm i.d., 5μm);預柱: Phenomenex C18柱(4 mm×3 mm, 5μm);紫外檢測波長: 226 nm;柱溫: 35·0℃;進樣體積20μL;流動相:乙腈-水;流 速: 1·0 mL/min;梯度洗脫,步驟如下表1所示。
1.3 標準溶液配制
分別稱取DEP、BBP、DBP、DEHP、DOP標準 品各0·0500 g,分別用乙腈定容于50 mL容量瓶 中,配成1 mg/mL的5種PAEs的儲備液。 準確移取5種PAEs的儲備液各100·0μL,置 于同一10 mL容量瓶中,用V(乙腈)∶V(水)= 75∶25的混合溶液定容,配成10·0μg/mL的混合標 準應用溶液。再用水逐級稀釋,配成2·0、1·0、 0·20、0·10、0·020、0·010μg/mL的混合標準應用 溶液。
1.4 樣品處理
準確稱取已切碎的火腿腸0.5 g于試管中,加 入正己烷2 mL,勻漿,渦旋振搖3 min,超聲提取 15 min,在-10℃下10000 r/min離心10 min,取清 液;同法再萃取1次,合并2次清液, 45℃下氮氣 流吹干,用乙腈0.5 mL溶解殘渣,經0.45μm微 孔濾膜過濾后,進樣。以生產日期不超過15天, 距離表面1 cm以上的內層肉制品作為空白。
2 結果與討論
2.1 色譜條件的選擇
PAEs在205、226和272 nm處有3個特征吸收 峰,吸收強度依次增大,但272 nm處雜峰干擾較 多,綜合考慮吸收強度及干擾因素,選擇226 nm 作為檢測波長。
以純乙腈作為流動相時, BBP和DBP、DEHP 和DOP兩兩未能達到完全分離,增加流動相中水 的含量, 5種PAEs能完全分離,但DEHP和DOP 的出峰時間增長,當以V(乙腈)∶V(水)=75∶25的 流動相等度洗脫時, DOP的出峰時間超過了 50 min,故考慮采用梯度洗脫。在如表1所示條件 下5種PAEs完全分離,出峰時間控制在22 min之 內。
2.2 樣品處理條件的選擇
肉制食品所含成分復雜,目前主要采用有機 溶劑液相萃取。嘗試采用乙腈、乙醇、乙酸乙酯、 正己烷等溶劑,正己烷效果最好。因肉制食品含 有大量油脂,在萃取PAEs過程中油脂易被正己烷 同時提取,對樣品測試產生干擾。考慮DEP、BBP、 DBP、DEHP、DOP的凝固點分別為: - 40℃、 -35℃、-35℃、-55℃、-25℃,而大部分油 脂尤其是肉制食品中的主要油脂動物脂肪,在 -8℃以上即發生凝固,故在-10℃下高速冷凍 離心,可除去大部分油脂,減少干擾[14]。
2.3 特異性
圖1給出了一系列具有代表性的色譜圖。 圖1(a)是空白肉制食品的色譜圖,可見盡管有生 物雜質的特征峰,但均不在5種PAEs出峰時間 段,對分析物不產生干擾;圖1(b)為5種PAEs的 標準譜圖,濃度均為10·0μg/mL。DEP、BBP、DBP
