高架十字迷宮實驗相關-復方抗焦慮膠囊對急性應激大鼠的抗焦慮作用
復方抗焦慮膠囊對急性應激大鼠的抗焦慮作用及對大鼠腦內ERK/CREB信號通路和BDNF表達的影響
摘要:目的研究復方抗焦慮膠囊對急性應激大鼠的藥效及其對大鼠腦皮層及海馬ERK/CREB信號通路、腦源性神經營養因子(BDNF)的影響。方法采用高架十字迷宮實驗,觀察了復方抗焦慮膠囊低、中、高劑量(0．75、1．5、3g·kg-1)給藥7d對急性應激大鼠行為的影響,采用Westernblot免疫印跡法研究復方抗焦慮膠囊對ERK/CREB信號通路的影響,對急性應激大鼠腦皮層及海馬BDNF表達的影響。結果高架十字迷宮實驗顯示,復方抗焦慮膠囊高劑量組可明顯增加大鼠進入開臂時間的百分數(OT%)(P<0．05)和進入開臂次數的百分數(OE%)(P<0．05)。Westernblot實驗顯示,復方抗焦慮膠囊中劑量組明顯減少了海馬中p-ERK1/2的表達(P<0．05);高劑量組明顯減少了大鼠皮層和海馬中p-ERK1/2和p-CREB的表達(P<0．05)。高劑量組明顯增加了大鼠皮層及海馬中BDNF的表達水平(P<0．05,P<0．01)。結論復方抗焦慮膠囊在高架十字迷宮模型中具有抗焦慮作用,且其抗焦慮機制可能與影響ERK/CREB信號通路,增加BDNF表達有關系。
關鍵詞:復方抗焦慮膠囊;急性應激;高架十字迷宮;ERK/CREB信號通路;腦源性神經營養因子(BDNF);Westernblot免疫印跡法
焦慮癥是中樞神經系統常見的精神疾病,成為日益增長的全球健康問題。焦慮癥以急性焦慮反復發作為特征,臨床表現為廣泛性焦慮和發作性驚恐狀態2種形式。臨床上以恐懼、緊張不安等精神障礙為主要表現,并伴有心悸、多汗、胸悶、呼吸窘迫以及睡眠障礙等。在精神障礙中,焦慮癥的終生患病率最高,影響到30%人口的壽命。在我國,焦慮癥已成為現代常見病和多發病,嚴重影響了人們的生活質量。因此,焦慮癥的有效治療成為亟待解決的問題。
苯二氮卓類藥物已被證明是有效的抗焦慮藥,如地西泮等,但這些化合物存在明顯的副作用,如鎮靜、肌肉松弛、遺忘和依賴性。并且抗焦慮藥物的服藥時程長,易導致戒斷反應、反跳和依賴。臨床證實,中藥治療焦慮癥不僅安全有效、副作用小,還具有改善其它相關癥狀的作用。因此,研究開發療效好、副作用小的中藥抗焦慮新藥成為近些年來研究的熱點。
復方抗焦慮膠囊(antianxieticcompoundprescriptioncapsule,ACPC)來源于臨床經驗方,由蜘蛛香、合歡皮、炒酸棗仁、燈心草組成,功能理氣解郁、養血安神,主要治療肝郁氣滯、心神不寧型焦慮癥。前期研究表明,該復方具有穩定的抗焦慮作用,且不影響動物的自主行為活動,其作用機制與調節GABAA受體[9-10]、Cdk5/p35通路的表達,抑制腦中單胺類神經遞質的釋放以及調節免疫功能紊亂相關。為了更加深入地對復方抗焦慮膠囊的藥效進行評價,明確其作用特點,為其安全有效的應用提供實驗和理論依據,本實驗探討了復方抗焦慮膠囊對急性應激大鼠的作用及其機制。
1材料
1.1動物SPF級SD♂大鼠,體質量150~170g,購自北京維通利華實驗動物技術有限公司,動物許可證號:SCXK(京)(2012-0001)。
1.2藥品與試劑①蜘蛛香藥材購自云南省師宗縣,炒酸棗仁、合歡皮和燈心草購于河北省安國市藺氏有限責任公司,經北京中醫藥大學石晉麗教授鑒定,蜘蛛香為敗醬科纈草屬植物蜘蛛香ValerianajatamansiJones的干燥根莖及根;酸棗仁為鼠李科棗屬植物酸棗ZiziphusjujubaMill.var.spinosa(Bunge)HuexH.F.Chou的干燥種子;合歡皮為豆科植物合歡AlbizziajulibrissinDurazz.的樹皮;燈心草為燈心草科植物燈心草JuncuseffusesL.的干燥莖髓。蜘蛛香、炒酸棗仁、合歡皮、燈心草(均為干浸膏)按照12∶9∶9∶1的質量比混合,再加入0.5倍干膏量的糊精混勻,制成顆粒,干燥,分裝,即得復方抗焦慮膠囊(含橙皮苷1．05mg·g-1、酸棗仁皂苷A7.50mg·g-1),實驗前用氯化鈉注射液將其制成溶液備用。②地西泮(diazepam,DZP),2．5mg×20片,國藥準字H11020898,北京益民藥業有限公司,批號20120305。③氯化鈉注射液,國藥準字H37020764,山東齊都藥業有限公司,批號1012081004。④RIPA裂解液、Bradford蛋白濃度測定試劑盒、30%丙烯酰胺-雙丙烯酰胺、膜再生液、封閉用脫脂奶粉均購自北京普利萊生物科技有限公司;過硫酸銨(ammoniumpersulphate,AP)為美國Amersco公司產品;甲叉雙丙稀酰胺、四甲基乙二胺(TEMED)、十二烷基硫酸鈉(sodiumdodecylsulfate,SDS)為美國Sigma公司產品;三氨基甲烷(Tris)、甘氨酸購自美國Novon公司;p-ERK1/2、ERK1/2、pCREB和CREB抗體為CellSignaling公司產品;β-actin單克隆抗體為SantaCruz公司產品;HRP標記山羊抗兔及兔抗山羊二抗均為中杉金橋公司產品;ECL發光檢測試劑盒及光譜彩虹預染蛋白Marker均為康為公司產品;PVDF膜為美國Millipore公司產品;其它試劑為國產分析純。
1.3儀器
1.3.1高架十字迷宮大鼠高架十字迷宮(XR-XG201型上海欣軟公司)包括兩個閉臂(50．225px,寬10．100px,高40．225px)與兩個開臂(50．225px,寬10．100px),距地面74．75px。
1.3.2束縛管聚乙烯材料束縛管自制(規格:長22．150px,直徑7．225px)。
1.3.3Westernblot免疫印跡實驗儀器超聲勻漿機(USASonic公司)、高速冷凍離心機(BeckmanAllegra64R)、移液器(1000、200、100、20μL)(德國Eppendorf公司)、UNIC7200型分光光度儀(上海UNIC公司)、-80℃低溫冰箱(Forma,美國)、垂直板電泳轉移裝置(美國Bio-Rad公司)、恒溫水浴搖床(上海比朗儀器有限公司)、多用脫色搖床、多功能酶標儀(美國MultiskanEXPRIMA-RYEIAV.2．3)。