[摘要] 目的:建立龍膽中高純度龍膽苦苷的快速分離制備方法。方法:藥材醇提取液經D101大孔吸附樹脂柱的層析物直接進行高速逆流色譜( high2speed counter2current chromatography, HSCCC)分離純化,以醋酸乙酯-正丁醇2水(2∶1∶3)為溶劑系統,下相為流動相,流速115 mL·min- 1 ,檢測波長254 nm,分離溫度30 ℃,所得產物經高效液相色譜與質譜分析檢測,并與標準品對照。結果:在此條件下,經一步分離從300 mg粗提物中得到136 mg純度為9916%的龍膽苦苷。結論:該法簡便、快速、所得產物純度高,適合于龍膽苦苷標準品的制備。
[關鍵詞] 龍膽;高速逆流色譜;大孔樹脂;龍膽苦苷
龍膽為龍膽科植物龍膽Gentiana scabra Bge. 、條葉龍膽G. m anshurica Kitag. 、三花龍膽G. trifloraPal1. 、堅龍膽G. rigescens Franch. 的干燥根及根莖,性寒、味苦;歸肝、膽經;具有清熱燥濕、瀉肝膽火的功效[ 1 ] 。近年來用于健胃、抗腫瘤、治療急慢性肝炎、乙型腦炎等疾病亦取得良好療效[ 2 ] 。龍膽中主要的化學成分是裂環烯醚萜類化合物,如龍膽苦苷( gentiop icrin) 、獐牙菜苦苷( swertiamarin) 、獐牙菜苷( sweroside)等,其中龍膽苦苷是龍膽的主要有效成分。目前分離制備龍膽苦苷多采用傳統硅膠柱色譜法或聚酰胺柱色譜法[ 3 ] ,這些方法不僅費時費力、污染環境,而且所用固定相對樣品有不可逆性吸附作用。高速逆流色譜(HSCCC)是一種較新型的液液分配色譜技術,它不用任何固體支撐體或載體而克服了傳統分離方法對樣品的不可逆性吸附作用,
因而樣品回收率高,同時還具有應用范圍廣、儀器操作簡單、分離量大等優點[ 4, 5 ] 。本研究中采用溶劑提取和大孔樹脂柱色譜得到粗提物,以此粗提物直接進行HSCCC分離純化,經一步洗脫分離得到純度高于99%的龍膽苦苷,該法操作簡單、快速、產物純度高。目前,尚未見快速、簡便制備高純度龍膽苦苷的報道。