雞肉中抗生素檢測

近日，媒體曝光了肯德基的大供貨商 - 山西粟海集團“45天食用雞”事件。一只雞用飼料和藥物喂養，從孵出到端上餐桌，只需要45天！ 報道稱，僅在養殖階段的11天中，就有多達11種抗生素藥物喂給肉雞。這則消息在網絡上引起了廣泛的關注和討論。

抗生素（antibiotics）是由微生物（包括細菌、真菌、放線菌屬）或高等動植物在生活過程中所產生的具有抗病原體或其它活性的一類代謝產物。抗生素能干擾其他生活細胞發育功能。上世紀40年代，科學家們發現，飼料中添加抗生素或其發酵殘渣，能促進畜禽生長。1950年，美國食品與藥物管理局（FDA）首次批準在飼料中添加抗生素，以后，世界各國相繼進行了抗生素的飼喂試驗，并用于生產。中國農業部發布了《允許作飼料藥物添加劑獸藥品種及使用規定》，允許用作飼料添加劑的抗生素品種有3類30種，并分別對適用動物、最低用量、最高用量及停藥期作了嚴格規定。可以說，正常添加的抗生素完全是合法合理的。而不合乎《允許作飼料藥物添加劑獸藥品種及使用規定》所添加的抗生素則是非法的。

目前常見的非法添加抗生素主要是抗生素的過量使用，以常見的抑菌類抗生素—金霉素為例，《允許作飼料藥物添加劑獸藥品種及使用規定》中指出，食用動物（包括肉雞）的使用年齡上限為10周，最高用量為5000萬單位/噸（配合飼料），并且補充要求在高用量時低鈣飼料連用不得超過5天。過量使用會導致雞肉中殘留金霉素超標。農業部《動物性食品中獸藥最高殘留限量(農業部2002年235號公告)》要求，金霉素在雞肉中殘留量不得超過100 μg/kg。國家質量監督檢驗檢疫總局也發布標準《GB/T 20764-2006 可食動物肌肉中土霉素、四環素、金霉素、強力霉素殘留量的測定 液相色譜-紫外檢測法》，明確了檢測方法及檢測限度。

根據《GB/T 20764-2006》，RephiLe特別推出雞肉中金霉素檢測的解決方案。采用HPLC檢測法，檢出限為0.005 mg/kg。詳細解決方案如下：

1.  適用范圍

適用于牛肉、羊肉、豬肉、雞肉和兔肉中的金霉素殘留量的測定。

2.  原理

用0.1 mol/L Na₂EDTA-Mcllvaine（pH=4.0±0.05）緩沖液提取動物肌肉中金霉素殘留，提取液經離心后，上清液用Oasis HLB固相萃取柱和羧酸型陽離子交換柱純化，HPLC檢測，外標法定量。

3.  樣品提取

取樣品1 kg，充分攪碎，混勻，分成兩份，分別裝入潔凈容器中密封為試樣。-18 ℃冷凍保存。稱取樣品6.00 g±0.01 g于50 mL具塞離心管中，加入30 mL Na₂EDTA-Mcllvaine緩沖溶液。均質1 min后冰水浴超聲10 min。提取液以10000 r/min離心10 min，上清液倒入另一離心管中。殘渣加入20 mL緩沖溶液重復提取一次。合并上清液。

4.  凈化

將樣品提取上清液加入Oasis HLB固相萃取柱，流速≤3mL/min。上清液完全流出后用5 mL甲醇+水（1+19）洗柱，并用真空泵抽干40分鐘。棄去流出液。用15 mL乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液于100mL燒瓶中。

將上述洗脫液減壓條件下以≤3mL/min得流速通過羧酸型陽離子交換柱。洗脫液完全流出后用5 mL甲醇洗柱，并用真空泵抽干5分鐘。棄去流出液。用4mL流動相：乙腈+甲醇+0.01mol/L草酸溶液（2+1+7）洗脫，收集洗脫液于5mL樣品管中。定容至4mL。用13mm，0.22 μm PTFE針頭式過濾器過濾。

5.  色譜

色譜柱：Mightsil RP-18 GP 3μm（150mm×4.6 mm）；

流動相：乙腈+甲醇+0.01mol/L草酸溶液（2+1+7）

流速：0.5 mL/min；

柱溫：25℃；

進樣量：60 μL。

為確保實驗的準確性，液相用水必須使用符合中華人民共和國標準GB 6682-2008的一級水。其他各種標準溶液的配置最少需要用到二級水。RephiLe的Direct-Pure EDI與PURIST經典組合套裝，可以同時提供高純水及超純水，滿足全方位的實驗室用水需求。RephiLe Direct-Pure EDI高純水系統選用Siemens公司的EDI模塊，以自來水為進水，提供穩定優質的高純水，產品達到同類產品先進水平。PURIST系列超純水系統，精致小巧，使用簡便，以純水為進水，生產超純水，水質超過或達到GB以及ASTM、CAP、CLSI等的一級水標準。RephiLe純水系統已通過FCC、CE等多種認證，同時有專業的驗證工程師，提供所需的驗證服務支持，以及通過各種標準所需的3Q認證，有助于協助用戶通過GMP、GLP等體系認證，可以保證用戶在使用中用水無憂。為答謝廣大用戶的厚愛，RephiLe在2012年末推出特別促銷活動，每套經典組合套裝僅售40888元，更有購機好禮。詳情請參見http://www.rephile.cn/news/newsDetail_282.html。另外，RephiLe也可提供使用自來水作為進水的一體化純水系統Direct Pure UP, 可同時生產RO及超純水，供廣大客戶選擇。

為更好地保護HPLC儀器，上樣前需將溶液預先過濾，除掉溶液中顆粒及微生物，防止色譜柱堵塞、損壞泵等情況發生，從而保證儀器的操作性能及延長儀器使用壽命。RephiLe提供PES、PTFE、Nylon、MCE等多種針頭式過濾器，適用于色譜分析樣品過濾。