黃曲霉毒素分析方法匯總

  一、多功能凈化柱+KRC光化學柱后衍生法

　　1 簡介

　　多功能凈化柱是由多種固相復合填料不僅包括大分子物質，更重要的是含有多種活性親脂性(非極性)和帶電(極性)物質，用來吸附各種酯類，葉黃素，化學物質，碳水化合物和蛋白質等干擾物。多功能凈化柱+KRC衍生法就是利用PRIBOLAB公司的Pribofast 226/260多功能凈化柱可以將黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2很好的分離出來，然后用HPLC/FLD+KRC柱后衍生系統可以有效的測定黃曲霉毒素 B1、B2、G1、G2含量。

　　2 多功能凈化柱特點：

　　2.1 多功能凈化柱可以簡化樣品提取、凈化步驟，無需清洗和洗提。

　　2.2 可以實現多種毒素檢測，有效降低檢測成本;

　　2.3 HPLC+FLD+KRC衍生化，可以有效提高檢測靈敏度，實現較低的檢測限(黃曲霉毒素B1 0.05ppb);

　　2.4 光化學衍生操作簡便，無需使用衍生試劑(通常電化學柱后衍生均需要使用衍生試劑，分析成本高，操作麻煩，儀器故障率較高);

　　2.5 一步法凈化，回收率高達90%左右。

　　2.6 廣泛適用于各類農產品：谷物、淀粉、動物飼料、食品、堅果、棉籽等。

　　3 多功能凈化柱/KRC衍生法操作步驟簡介：

　　3.1 提取樣品：研磨粉碎、稱重25g樣品;用乙腈/水(84/16 V/V)混合樣品，

　　高速均質 1 分鐘。

　　3.2 過濾：將提取的樣品定量濾紙過濾，收集濾液;

　　3.3 取4-6ml濾液快速通過 多功能凈化柱PribofastM226 或Pribofast M260

　　3.4 收集過柱溶液，直接用于HPLC檢測，KRC衍生化后直接記錄黃曲霉毒素濃度。

　　二、免疫親和柱+KRC光化學柱后衍生法

　　1 簡介

　　Pribofast黃曲霉毒素總量免疫親和柱可選擇性吸附樣品液中的毒素，從而對毒素樣品起到非常針對性的純化作用，然后用HPLC/FLD+KRC柱后衍生系統可以有效的測定黃曲霉毒素 B1、B2、G1、G2濃度，提高檢測的準確性和靈敏度。

　　2 免疫親和柱/KRC衍生法特點：

　　2.1 特異性很強使得樣品凈化效果極佳;

　　2.2 使用免疫親和柱操作架可以使樣品凈化快速，提高檢測效率高

　　2.3 HPLC+FLD+KRC柱后衍生化，有效提高檢測靈敏度，實現較低的檢測限 (黃曲霉毒素B1 0.05ppb)。

　　2.4 衍生化操作方便，光化學衍生化無需使用衍生試劑(通常電化學柱后衍生均需要使用衍生試劑，分析成本高，操作麻煩，儀器故障率較高)。

　　2.5 回收率高，達到90%以上

　　3 免疫親和柱法操作步驟簡介：

　　3.1 提取樣品：研磨、稱重50g樣品;用甲醇/水(80/20 V/V)混合物將樣品

　　高速混勻 1 分鐘。

　　3.2 過濾：將提取的樣品濾膜過 玻璃纖維濾紙，

　　3.3 將回溫的免疫親和柱安裝在泵流操作架進行過柱凈化：經過Pribofast黃曲霉毒素總量免疫親和柱(IAC-010-3)活化、淋洗、洗脫三步驟，洗脫下來的溶液可直接用于HPLC檢測;

　　3.4 測定：HPLC直接進樣，經色譜柱、KRC光化學柱后衍生化后直接記錄黃曲霉毒素濃度;

　　三、酶聯免疫法檢測黃曲霉毒素總量

　　1 采取直接競爭ELISA方法，利用酶標儀測定樣品和標準品的樣本的吸光值計算得到樣品中黃曲霉毒素總量的含量。

　　2 試劑盒檢測時間：15分鐘+15分鐘

　　3 檢測限：0.1ppb

　　4 交叉反應率：

　　關于Pribofast KRC 柱后衍生器和 HPLC參數

　　●Pribofast KRC 柱后光化學衍生器 波長：254 nm

　　●HPLC-色譜柱： 黃曲霉毒素專用色譜柱150 x 4.6 mm; C-18

　　●流動相: 甲醇/水 (45/ 55 v / v)

　　●流量：1.0 mL/min 柱溫： 30 °C

　　●進樣體積：20μL

　　●熒光檢測器：λ-激發波長：365 nm λ-發射波長：440 nm

　　●高效液相色譜儀需要配制：PriboLab公司Pribofast KRC 柱后光化學衍生器，含有1ml反應池，納米燈管254nm

　　關于黃曲霉毒素專用色譜柱：