病原微生物染色實驗——細菌

細菌體積較小，可在顯微鏡油鏡下進行觀察。細菌中的酸性蛋白質，通過革蘭（Gram）堿性染料進行結合，遇革蘭碘以后形成復合物，再經過分化劑，則顯示革蘭陽性菌（+）和革蘭陰性菌（-）。常用 Gram 堿性復紅-結晶紫革蘭法。

石蠟組織切片

二甲苯無水乙醇中性樹膠蒸餾水堿性復紅石炭酸（苯酚）苯胺油碘片碘化鉀結晶紫草酸銨

滴管

苯胺油-石炭酸-復紅染色液：堿性復紅 0.5 g，苯胺油 1 ml，石炭酸（苯酚）1 g，30％ 乙醇 70 ml。先將堿性復紅溶解于乙醇，加熱、冷卻后再加入石炭酸和苯胺油。

革蘭碘液：碘片 0.5 g，碘化鉀 1 g，蒸餾水 150 ml。

結晶紫染色液：結晶紫 2 g，95％ 乙醇 20 ml，草酸銨 1 g，蒸餾水 80 ml，分別將結晶紫溶解于乙醇，草酸銨溶解于蒸餾水，然后進行混合，可使用較長時間。

1. 石蠟組織切片，常規脫蠟至水。

2. 苯胺油-石炭酸-復紅染色液染色 5 min，自來水洗 1 min。

3. 蒸餾水洗后，用 40％ 甲醛處理 1 min。

4. 蒸餾水洗 1 min，苦味酸飽和液處理 2 min。

5. 95％ 乙醇快速處理一下，即放入水中，可見組織變紅色。

6. 蒸餾水洗 1 min，結晶紫染色液染色 2 min。

7. 自來水洗后 1 min，蒸餾水洗 2 次。

8. 革蘭碘液處理 2 min，水洗后用濾紙吸干。

9. 苯胺油與二甲苯等量混合液，進行分化（鏡下控制分化程度）。

10. 二甲苯透明，中性樹膠封固。

1. 苯胺油-石炭酸-復紅染色液易產生結晶，染色時適當加熱，防止切片污染。

2. 苯胺油與二甲苯分化時，應將切片搖動，便于分色均勻。

結果：革蘭陽性菌呈藍色，陰性菌呈紅色。