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應用末端截切、進化、再延長技術提高酶穩定性的方法實驗2

3.8 蛋白質表達及純化 β-內酰胺酶突變體（野生型間質定位的、野生型胞質定位的、N△5、優化的 N△5-S3/6、N△5- S5/S7 和 FL-S3/6 胞質定位的突變體）在 lac 啟動子下于 E.coli 細胞中帶 His -tag 融合表達（見 16.3.8.1)。通過兩步純化反應進行純化，首先用底物相似的親和層析苯基硼酸鹽柱子（見 16.3.8.2 )，再用 IMAC ( 見 16.3.8.3 )。這種純化步驟非常適用于 N△5 (圖 16. 5 ) 和 N△5- S3/7 突變體的純化。對于某些 β-內酰胺酶突變體（野生型、N△5- S3/6、FL-S3/6)，其純化的蛋白質有很高的污染并呈未加工完全的形態（30%~ 65% ; 見注 7 )，極可能是因為過表達或者折疊太快造成的。由于即使是對旨在高產率的細胞間質提取物純化也會引入污染，所以疏水親和層析（ HIC ) 被用來將蛋白質的自然形態與......閱讀全文