WIKI資訊

酵母菌基因組轉座子的誘變實驗—小載體聚合酶鏈反應

實驗材料誘變轉座子基因組文庫質粒DNA試劑、試劑盒錨定囊泡引物1和2 、1 mol L MgCl2、普通小載體（UV)和mTn引物、轉座子誘變酵母菌株、合適的限制性內切核酸酶（如AZmI或DraI)和緩沖液、10×T4 DNA連接酶緩沖液、5 mmol L ATP、400 U μL T4 DNA連接酶（檢測于黏合末端連接單位）、5 U μL Tag DNA聚合酶和1O×緩沖液、2.5 mmol L 4 dNTP 混合液儀器、耗材加熱塊、自動化熱循環控制儀實驗步驟1)準備小載體PCR，合成錨定囊泡引物。形成錨形囊泡如下：a.配置一種水溶液，這種溶液中含有2?4 mmol/L的每種錨定囊泡引物1和2。b.在加熱塊上以95℃孵育5 min變性。c.加入1 mol/L MgCl2至溶液終濃度為2 mmol/L通過從底部裝置撤掉加熱塊并將其放在試驗臺上直至冷卻到室溫使其變性。-20℃儲存至第5步。2)合成普通小載體（UV)引物。合成與產生......閱讀全文