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    快速了解染色質免疫共沉淀技術(ChIP)

    ChIP技術的原理 在生理狀態下把細胞內的DNA與蛋白質交聯在一起,通過超聲或酶處理將染色質切為小片段后,利用抗原抗體的特異性識別反應,將與目的蛋白相結合的DNA片段沉淀下來,以富集存在組蛋白修飾或者轉錄調控的DNA片段,再通過多種下游檢測技術(定量PCR、基因芯片、測序等)來檢測此富集片段的DNA序列。(檢測相關技術服務:Real-time PCR技術服務、基因芯片及結果驗證服服務、高通量測序及結果驗證服務) ChIP技術實驗步驟 染色質免疫共沉淀技術包括3個獨立的步驟,即固定、沉淀和檢測。 第1步 固定 甲醛能有效的使蛋白質-蛋白質,蛋白質-DNA,蛋白質-RNA交聯,形成生物復合體,防止細胞內組分的重新分布。首先在體內用甲醛固定DNA和蛋白質復合物,需要注意甲醇的交聯時間,如果過長,細胞染色質難以用超聲波破碎,影響ChIP結果,而且實驗材料也容易在離心過程中丟失;交聯時間如果過短,則交......閱讀全文

    盤點:31項與免疫學有關的分子生物學實驗技術

      現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解,并且導致了免疫新策略的產生,免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。  一、GST pull-down實驗  GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶,GST pull-down實驗是一個行之有效的驗

    多名學者推薦全基因組分析轉錄因子功能新技術

      來自北卡羅來納大學教堂山分校,NIH等處的研究人員利用一種新型方法,分析了酵母轉錄因子Rap1在整個基因組中的結合動態,從而可以更好研究這一轉錄因子的功能,這一方法將有助于科學家們實時分析轉錄情況,相關成果公布在Nature雜志上。   對于這一成果,來自法國國家科學研究中心的Fran?ois

    基因組的三維結構

      摘要: 闡明染色質復雜結構的技術有染色質構象捕獲(chromatin conformation capture, 3C)及更高通量的衍生技術4C、5C,這些提供了長距離的染色質相互作用,但不能擴展到整個染色質相互反應組。在2009年末,兩種新方法的迸發,有望繪出全基因組范圍的相互作用圖譜。  

    干細胞牛人PNAS發布染色質蛋白組學分析法

      當下生物醫學研究的一個重要特點是技術手段的革新非常快,人類基因組計劃完成后,組學水平的研究使得從整體水平認識生命過程成為可能。美國懷海德生物醫學研究所(Whitehead Institute for Biomedical Research)的Richard A Young博士在這方面——尤其是利

    如何利用CRISPR-dCas9來研究基因調控

      順式調控元件(TRE)和反式調控元件(CRE)一直是人們感興趣的對象,通常利用染色質免疫沉淀(ChIP)和染色質捕獲技術來研究。不過,德克薩斯大學西南醫學中心的研究人員最近開發出一種新方法,結合CRISPR的靶定能力以及生物素-鏈霉親和素的互作優勢來鑒定TRE和CRE。  這種名為CAPTURE

    Cell雜志最受關注的五篇文章(4月)

      論文的通訊作者、BIDMC癌癥中心腫瘤學家、哈佛醫學院醫學副教授Gerburg Wulf說:“這項研究證實了PI3K作為一個主要的調控因子整合了癌細胞的結構和它的代謝。”糖分解與細胞結構是如何協調的?Wulf說,答案是一個驚人簡單的生物物理機制。  Wulf解釋道:“在正常細胞中,來自外部的信號

    RIP 技術--研究腫瘤發生和轉移中microRNA失調的有力工具

      microRNAs(miRNA)是一種內源性非編碼小分子RNA,一般具有18到25個核苷酸,其序列在進化上高度保守,通過靶向特定mRNA來調節基因的表達。   miRNA是越來越受關注的轉錄后調控網絡(post-transcriptional control)中重要的調控因子。首先,miRNA

    RIP 技術--研究腫瘤發生和轉移中microRNA失調的有力工具

      microRNAs(miRNA)是一種內源性非編碼小分子RNA,一般具有18到25個核苷酸,其序列在進化上高度保守,通過靶向特定mRNA來調節基因的表達。   miRNA是越來越受關注的轉錄后調控網絡(post-transcriptional control)中重要的調控因子。首先,miRNA

    RIP 技術——研究腫瘤發生和轉移中microRNA失調的有力工具 二

    但是miRNA具有成百上千個靶標,所以要完全理解一個miRNA和靶標的特異性反應與腫瘤發生之間的聯系,是一項非常具有挑戰性的工作,尤其是在癌癥研究中鑒別出miRNA的準確靶點仍然是一大難題。現已知道miRNA的調節功能是通過結合不同的蛋白質或RNA來實現的,因此研究miRNA與蛋白的結合情況對于揭示

    RIP技術(RNA結合蛋白免疫沉淀)

    RIP技術(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA結合蛋白免疫沉淀),是研究細胞內RNA與蛋白結合情況的技術,是了解轉錄后調控網絡動態過程的有力工具,能幫助我們發現miRNA的調節靶點。RIP這種新興的技術運用針對目標蛋白的抗體把相應的RNA-蛋白復合

    RIP技術研究腫瘤發生和轉移中microRNA失調的有力工具

    microRNAs(miRNA)是一種內源性非編碼小分子RNA,一般具有18到25個核苷酸,其序列在進化上高度保守,通過靶向特定mRNA來調節基因的表達。miRNA是越來越受關注的轉錄后調控網絡(post-transcriptional control)中重要的調控因子。首先,miRNA結合到核糖核

    中國科學院植物研究所破解果實衰老腐敗的秘密

       “離本枝一日而色變,二日而香變,三日而味變。”唐朝時楊貴妃想吃上一口新鮮的荔枝,需要官方驛站快馬加鞭。而如今荔枝、香蕉、獼猴桃,這些容易“爛”的水果經過科學的保鮮方式,從千里之外可以活色生香地出現在我們的餐桌上。   當你在大快朵頤鮮美的水果時,有沒有想過為什么有的水果采摘之后,很快會變質呢?

    再次飛躍 | 短短2天,中國學者連續發表11篇CNS

    3.楊輝/李亦學/Lars M. Steinmetz等團隊建立新型脫靶檢測技術,基因編輯工具安全性評估或迎來新突破  CRISPR/Cas9是廣泛關注的新一代基因編輯工具,自從2012年被發明以來,它一直以其高效性和特異性備受世人的期待,然而值得注意的是,CRISPR/Cas9從問世以來,其脫靶風險

    高通量測序技術的原理及各平臺優勢和實踐應用的分析

      隨著人類基因組計劃(human genome project )在2003年順利完成,基因組測序技術取得了長足的進步,這直接導致了每兆基因組成本的大幅下降以及檢測的基因組數量越來越多。人們對基因組的復雜性深感震驚,這也引導著測序技術的進一步發展。最近的一些突破性技術使得測序技術在更短的時間內可以

    一個課題組兩篇Cell發布病毒與宿主相互作用重要研究

    Drug targets for Dengue, Zika and Ebola viruses。圖片引自:https://www.drugtargetreview.com/news/38327/drug-targets-virus/  病毒是與其宿主共同進化數百萬年的分子機器,以利用其專門的細胞內環

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