下一代測序(NGS) 工作流程中，模板制備步驟是在Ion PGM? 和Ion Proton? 平臺上獲得最佳測序產量的關鍵，文庫輸入量是其中的決定性因素。文庫濃度過高或過低都會導致總讀取數下降，從而降低系統的總通量。因此，在模板制備之前，精確的高質量文庫定量方法是使測序通量最大化的關鍵。
數字PCR (dPCR) 提供了一種高度精確的定量方法，無需參照或標準曲線即可進行核酸樣本的絕對定量。將基于芯片的QuantStudio? 3D 數字PCR 系統與預先經過驗證的Ion Torrent? 文庫定量Assay 相結合，是該應用領域的最佳選擇。
QuantStudio? 3D 數字PCR 芯片將一個標準的PCR 反應混合物分成20,000 個單獨的PCR 反應。這種直接的樣本稀釋過程可以使眾多反應中的一部分反應含有目標分子，另一部分則不含有目標分子，分別代表陽性和陰性反應。在雙槽式PCR 儀上擴增后，利用定量樣本中陰性反應的目標分子比例直接計算樣本拷貝數，無需參照標準品或對照品即可對目標樣本進行絕對定量。
QuantStudio? 3D 數字PCR 系統用于NGS 文庫定量的主要優點包括：
●高度精確且可重復的定量結果，無需標準曲線或參考樣本
●最少的樣本處理步驟，減少了操作時間
●密封的芯片耗材，最大程度地降低了擴增片段或其他核酸序列的污染可能
●經濟實惠的系統和耗材，可大大提高測序結果質量，節省成本
本應用說明介紹了采用QuantStudio? 3D 數字PCR 系統進行Ion Torrent? NGS 文庫定量的一種簡單的工作流程。利用該工作流程可以在Ion PGM? 或Ion Proton? 系統上獲得穩定的測序數據，無需重復模板化微珠制備步驟，節省了時間和成本。