蛋白結合分析:將NOS固定OpenSPR的納米金芯片表面,并對CaM做濃度梯度檢測,結果導入TraceDrawer分析。(圖4 )OpenSPR實時檢測,梯度稀釋后不同濃度檢測出野生型CaM對nNOS(紅線)和eNOS 肽(紫紅線)的結合情況,觀察結合、解離及再生的整個過程,結果顯示實驗曲線穩定及信號顯著。(圖5) 不同突變的CaM 與cNOS結合數據導入TRACE DRAWER 軟件分析,獲取Koff、 Kon及 KD值,結果如下:結果顯示:CaMcc與cNOS 的親和力高于wt CaM,相對wt CaM,所有突變型的CaM除了nCaM及CaMcc,與NOS解離速率都加快,并且結果與之前傳統方法得出只有CaMc能激活NOS,其他激活效果差或不激活的結果一致,也有效的證明了OpenSPR 在CaM 與cNOS結合研究中的準確性,并且檢測方法簡單,數據結果豐富,首次闡述了CaM激活cNOS激活機制是因CaM發生了EF手......閱讀全文
LSPR技術在檢測鈣調素與NO合成酶靶向肽偶聯動力學中的應用新一代SPR創新技術應用典型 :LSPR技術在檢測鈣調素與NO合成酶靶向肽偶聯動力學中的應用鈣調素(CaM) 是一個小分子的酸性 Ca2+ 偶聯蛋白,參與很多的生理過程,鈣調蛋白可以與很多不同的蛋白質結合,因此影響了細