交聯質譜技術(英文全稱Chemical cross-linking of proteins coupled with mass spectrometry, 簡稱CXMS或XL-MS);CXMS利用化學交聯劑將蛋白質或蛋白質復合體中空間距離足夠接近的兩個氨基酸通過共價鍵連接起來,酶切成肽段后用質譜鑒定出交聯位點,從而獲取低分辨度結構信息,幫助推斷蛋白質在三維空間的折疊狀態以及蛋白-蛋白相互作用的大致區域。相比于晶體和冷凍電鏡技術, CXMS對樣品量和樣品純度要求低,可捕獲蛋白質在溶液中的動態,并且具有簡單、快速等優點。因此,CXMS在過去十年中得到了廣泛應用,常常助力解析大型蛋白質復合體的精細結構,以及尋找蛋白與蛋白之間直接相互作用的區域。 交聯質譜技術有三個支撐點(交聯劑、質譜儀器和方法、鑒定軟件)和一個原動力(解決實際生物學問題)。當前交聯質譜技術的一個明顯局限是過分依賴氨基特異性的NHS酯交聯劑。此類交聯劑主要靶向賴氨......閱讀全文
化學交聯結合質譜技術 (chemical cross-linking coupled with mass spectrometry, CXMS) 是近年來迅猛發展的一種檢測蛋白質結構和蛋白質相互作用的方法。隨著質譜儀器以及交聯數據搜索軟件的發展,CXMS技術已經獲得了長足的進步,但在該技術中能夠
對于復雜混合物,如全細胞裂解物或富集的亞細胞組分,通過兩步正交的分離 (orthogonalseperation),二維凝膠 (2D 膠)電泳可以很好地分離成幾百個至上千個單個蛋白質。第一次分離基于電荷,即使用變性等電聚焦電泳; 第二次分離基于表觀分子質量,即使用變性十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電
等電聚焦和二維凝膠電泳實驗 試劑、試劑盒 樣品緩沖液