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將制備好的siRNA，siRNA表達載體或表達框架轉導至真核細胞中的方法主要有以下幾種： 1.磷酸鈣共沉淀 將氯化鈣，RNA(或DNA )和磷酸緩沖液混合，沉淀形成包含DNA 且極小的不溶的磷酸鈣顆粒。磷酸鈣-DNA 復合物粘附到細胞膜并通過胞飲進入目的細胞的細胞質。沉淀物的大小和質量對于磷酸鈣轉染的成功至關重要。在實驗中使用的每種試劑都必須小心校準，保證質量，因為甚至偏離最優條件十分之一個pH都會導致磷酸鈣轉染的失敗。 2.電穿孔法 電穿孔通過將細胞暴露在短暫的高場強電脈沖中轉導分子。將細胞懸浮液置于電場中會誘導沿細胞膜的電壓差異，據認為這種電壓差異會導致細胞膜暫時穿孔。電脈沖和場強的優化對于成功的轉染非常重要，因為過高的場強和過長的電脈沖時間會不可逆地傷害細胞膜而裂解細胞。一般，成功的電穿孔過程都伴隨高水平（50%或更高）的毒性。 3.DEAE-葡聚糖和polybrene 帶正電的DEAE-葡聚糖或polybren......閱讀全文
1. RNAi 介紹RNA 干擾（RNAi:RNA interference）是由諾貝爾生理學/醫學獎得主 Andrew Z. Fire 和 Craig C. Mello（1）在線蟲實驗中發現的，2001 年 Elbashir 等人發現哺乳類的 siRNA 可以進行 RNAi 誘導。這個方法與常規方
幾十年來生物學上最重要的進展，也許是關于RNA分子能調節基因表達的發現。RNA干涉（RNAi）是指雙鏈RNA分子使基因表達沉寂的現象，是在線蟲中發現的，在 1998年的一篇Nature論文中被公諸于眾。 此后，科學家們明白，RNAi還有其他形式，它既
1. RNAi 介紹 RNA 干擾（RNAi:RNA interference）是由諾貝爾生理學/醫學獎得主 Andrew Z. Fire 和 Craig C. Mello（1）在線蟲實驗中發現的，2001 年 Elbashir 等人發現哺乳類的 siRNA 可以進行 RNAi 誘導
RNAi實驗原理與方法近年來的研究表明，將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞，可以使mRNA發生特異性的降解，導致其相應的基因沉默。這種轉錄后基因沉默機制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被稱為RNA干擾（
近年來的研究表明，將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞，可以使mRNA發生特異性的降解，導致其相應的基因沉默。這種轉錄后基因沉默機制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被稱為RNA干擾（RNAi）。一、RNA
實驗概要本文介紹了RNA干擾的原理及基本實驗方法，包括了siRNA的設計、siRNA的制備和siRNA的轉染等方法，及RNA干擾實驗中的注意事項。實驗原理近年來的研究表明，將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞，可以使mRNA發生特異性的降解，導致其相應的基因
步驟包括:(一)siRNA的設計1. 在設計RNAi實驗時，可以先在以下網站進行目標序列的篩選：GenesilAmbion2. RNAi目標序列的選取原則：(1)從轉錄本（mRNA）的AUG起始密碼開始，尋找“AA”二連序列，并記下其3'端的19個堿基序列，作為潛在的siRNA靶位點。有研究
實驗概要進行RNAi實驗實驗原理通過生化和遺傳學研究表明，RNA干擾包括起始階段和效應階段(inititation and effector steps)。在起始階段，加入的小分子RNA被切割為21-23核苷酸長的小分子干擾RNA片段(small interfering RN
A．siRNA轉染的方法 哺乳動物轉染的常見方法有：磷酸鈣共沉淀、電穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、機械法（例如,顯微注射和基因槍）、陽離子脂質體試劑，其中陽離子脂質體試劑轉染法是目前最常用的轉染方法。應用脂質體型轉染試劑進行轉染需要注重的
siRNA表達載體構建可應用于：（1）作為后基因組時代基因功能分析的有力工具；（2）基因組學、細胞信號傳導通路分析；（3）藥物靶點篩選、疾病治療。實驗方法原理多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，操縱一段小的發夾RNA(short hairpin RN
實驗方法原理 多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種，操縱一段小的發夾RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺
3.用RNase III 消化長片斷雙鏈RNA制備siRNA其他制備siRNA的方法的缺陷是需要設計和檢驗多個siRNA序列以便找到一個有效的siRNA。而用這種方法——制備一份混合有各種siRNAs “混合雞尾酒” 就可以避免這個缺陷。選擇通常是200—1000堿基的靶mRNA模版，用體外轉錄
3.用RNase III 消化長片斷雙鏈RNA制備siRNA其他制備siRNA的方法的缺陷是需要設計和檢驗多個siRNA序列以便找到一個有效的siRNA。而用這種方法——制備一份混合有各種siRNAs “混合雞尾酒” 就可以避免這個缺陷。選擇通常是200—1000堿基的靶mRNA模版，用體外轉錄
RNAi 是一種高效的特異性強的基因表達抑制，應用RNAi生物學機制進行基因功能研究已經成為一種創新性的新方法，人們第一次可以如此快速和方便地抑制細胞中特定基因的表達水平，從而用于分析特定基因在細胞中的功能。RNAi 技術還為新藥開發、疾病治療提供了創新性的方法和途徑，有著極其廣闊的應用前景。轉染是
1. 對每個基因設計并檢測兩到四個siRNA序列 為了找到潛在靶位點，掃描靶基因中的AA序列。記錄每個AA 3’端19個核苷酸作為潛在siRNA靶位點。潛在靶位點需通過GENBANK數據庫的BLAST分析，去除那些與其它基因明顯同源的靶位點。如果可能，siRNA應
越來越多的研究人員開始采用小分子干擾RNA（small interfering RNAs，siRNAs)來抑制特定的哺乳動物基因表達。siRNA是一種短片斷雙鏈RNA分子，能夠以同源互補序列的mRNA為靶目標降解特定的mRNA，這個過程就是RNA干擾途徑（RNA interf
轉染試劑：Roche[選購寶典]現轉染市場多個新產品涌現而出，一些舊產品更弦易主。一提起羅氏的轉染試劑，大家肯定立馬想到Fugene 6/HD。即使Fugene 6/HD不在手，羅氏也毫不畏懼，因為它集合二十年的轉染經驗，推出了X-tremeGENE
將制備好的siRNA，siRNA表達載體或表達框架轉導至真核細胞中的方法主要有以下幾種：1.磷酸鈣共沉淀將氯化鈣，RNA(或DNA)和磷酸緩沖液混合，沉淀形成包含DNA且極小的不溶的磷酸鈣顆粒。磷酸鈣-DNA復合物粘附到細胞膜并通過胞飲進入目的細胞的細胞質。沉淀物的大小和質量對于磷酸鈣轉染的成功至關
將制備好的siRNA，siRNA表達載體或表達框架轉導至真核細胞中的方法主要有以下幾種： 1.磷酸鈣共沉淀將氯化鈣，RNA(或DNA)和磷酸緩沖液混合，沉淀形成包含DNA且極小的不溶的磷酸鈣顆粒。磷酸鈣-DNA復合物粘附到細胞膜并通過胞飲進入目的細胞的細胞質。沉淀物的大小和質量對于磷酸鈣轉
前言Lipofectamine? 2000試劑是一項專利配方，用于高效轉染Stealth? RNA或者短的干擾RNA（siRNA）到哺乳動物細胞，以進行RNAi分析（1，2）。該說明書提供了一般的指導以及使用Lipofectamine? 2000轉染Stealth? RNA或者siRNAj進入哺乳動
有關Stealth? RNAi的問題什么是Stealth? RNAi？Stealth? RNAi是RNAi化學的新一代產品。Stealth? RNAi分子是經過專利化學修飾的、鈍末端、雙鏈25聚體（25mer）。這些化學修飾專門用來消除誘導的細胞應激反應。它也使Stealth? RNAi比標準的si
dsRNA消化法的主要優點在于可以跳過檢測和篩選有效siRNA序列的步驟，為研究人員節省時間和金錢（注意：通常用RNAse III通常比用Dicer要便宜）。不過這種方法的缺點也很明顯，就是有可能引發非特異的基因沉默，特別是同源或者是密切相關的基因。現在多數的研究顯示 這種情況通常不會造成影
miRNA 模擬物是化學合成的，雙鏈RNA分子（通常長度為18–24個核苷酸），通過轉染到細胞中，模擬成熟的內源性miRNA分子。miRNA抑制劑是單鏈（通常長度為21–25個核苷酸），經過修飾的RNA分子，通過轉染到細胞中，特異性的抑制miRNA的功能。模擬物和抑制劑包含一些化學修飾，以
原代細胞相對普通傳代細胞要難轉染，但用對了試劑一樣可以擁有很高的轉染效率和實驗結果，下面以RFect為例，簡單介紹下原代細胞轉染的操作步驟和注意事項。原代細胞轉染操作步驟（以24孔培養板為例）：A. 細胞接種：轉染前一天接種細胞，每孔500 μl培養基（不可加抗生素），使細胞在轉染時密度在30-50
GenMuteTM siRNA轉染試劑（Cat#SL100568）是市場上最有力的siRNA傳遞工具之一。siRNA/DNA共轉染時，siRNA的最佳濃度范圍是0.5ηM到10ηM，過多的siRNA可能導致沉默效果差的“洪水效應”，切勿使用超過20ηM的siRNA。以24孔板為例，如下步驟將對如何優
siRNA在RNA沉寂通道中起中心作用，是對特定信使RNA（mRNA）進行降解的指導要素，細胞轉染實驗中經常會遇到siRNA轉染，下面介紹一下siRNA轉染成功的主要關鍵點。圖片來源于網絡 1.設計合成有效的siRNA RNAi的核心需要siRNA對相應mRNA進行有效的結合和作用。si
RNA干擾（RNA interference, RNAi）是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA（double-stranded RNA，dsRNA）誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。目前主要用于（1）特異性剔除或關閉特定基因的表達 （2）探索基因功能和傳染性疾病及惡性腫瘤的治療 （3）使
轉錄后基因沉默，也稱為RNA干擾，是指雙鏈RNA分子阻斷或者降低同源基因的表達的現象。這種現象可能是作為一種抑制病毒感染和轉座子跳躍的細胞防御機制(Ketting et. al., 1999; Tabara et. al., 1999; Jensenet. al., 1999; Ratc
RNA干擾 實驗方法原理 1. 病毒基因、人工轉入基因、轉座子等外源性基因隨機整合到
體外制備1.化學合成許多國外公司都可以根據用戶要求提供高質量的化學合成siRNA。主要的缺點包括價格高，定制周期長，特別是有特殊需求的。由于價格比其他方法高，為一個基因合成3―4對siRNAs 的成本就更高了，比較常見的做法是用其他方法篩選出最有效的序列再進行化學合成。最適用于：已經找到最有效的si