Protein表達是一個非常復雜的過程,因此很難預測表達的蛋白是否是可溶性的、包涵體形式還是部分降解的。為了預防各種可能的困難條件,在重組蛋白上導入兩種Tag可以提供獲得高純度均質蛋白的靈活性。蛋白含有兩種不同親和純化Tag的重要原因:純化全長的蛋白獲得最高純化的蛋白適合變性或生理條件下純化優化的操作過程,可以直接從培養基中純化蛋白與Strep-tag?配合最有效的是6xHistidine-tag,總之推薦一個Tag在蛋白的N-端,另外一個Tag在蛋白的C-端。純化全長蛋白:重組的蛋白在表達時會有部分降解,即使在下游的處理過程中加入蛋白酶抑制劑也無法避免。可溶性降解蛋白仍然帶有純化tag,在純化時會引起純化蛋白的不純(由于有不同長度片段的蛋白混入)。這種問題可以通過在蛋白的另一端加入第二種Tag來解決。經過第二種Tag的純化,即可獲得全長的蛋白。最高純度的蛋白:在生理條件下,Strep-tag純化可以將重組蛋白的純化提升到約99......閱讀全文
Double-tag在蛋白純化過程中的應用Protein表達是一個非常復雜的過程,因此很難預測表達的蛋白是否是可溶性的、包涵體形式還是部分降解的。為了預防各種可能的困難條件,在重組蛋白上導入兩種Tag可以提供獲得高純度均質蛋白的靈活性。蛋白含有兩種不同親和純化Tag的重要原因:純化全長的蛋白獲得最高
Double-tag在蛋白純化過程中的應用 Protein表達是一個非常復雜的過程