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【目的和要求】1. 掌握聚丙烯酰胺凝膠電泳的基本原理2. 掌握垂直板狀凝膠電泳槽的使用和凝膠的配制方法。3. 學會利用相對遷移率分析蛋白質種類。【實驗原理】帶電顆粒在電場的作用下，向著與其相反的電極移動，稱為電泳。電泳做為一種物質分離及鑒定技術，其原理在于任一物質質點，由于其本身的解離作用或由于表面上吸附有其它帶電質點，在電場中便會向一定的電極移動。蛋白質是兩性電解質，在一定的pH條件下，就會解離而帶電，帶電的性質和多少取決于蛋白質分子的性質和溶液的pH值和離子強度。處于pI的蛋白質分子所帶的電荷為零，在電場中不移動。若pH＜pI，蛋白質分子帶正電荷，在電場中向負極移動，pH＞pI的情況正好相反。 目前所采用的電泳方法大致可分為三類：顯微電泳，自由界面電泳及區帶電泳。以區帶電泳應用比較廣泛，區帶電泳按其支持物的物理性狀，可以分為四大類：（1）濾紙電泳及薄膜電泳（如醋酸纖維素薄膜電泳）；（2）粉末電泳：如纖維素粉、淀粉電......閱讀全文
電泳法，是指帶電荷的供試品（蛋白質、核苷酸等）在惰性支持介質（如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等）中，于電場的作用下，向其對應的電極方向按各自的速度進行泳動，使組分分離成狹窄的區帶，用適宜的檢測方法記錄其電泳區帶圖譜或計算其百分含量的方法。 電泳技術的
聚丙烯酰胺凝膠電泳，普遍用于分離蛋白質及較小分子的核酸。瓊脂糖凝膠孔徑較大適用于分離同工酶及其亞型，大分子核酸等應用較廣。瓊脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各種形狀、大小和孔隙度。瓊脂糖凝膠分離DNA度大小范圍較廣，不同濃度瓊脂糖凝膠可分離長度從200bp至近50kb的DNA段。瓊脂糖通常用水平裝置在強度和
（一）醋酸纖維素薄膜電泳 醋酸纖維素是提纖維素的羥基乙酰化形成的纖維素醋酸酯。由該物質制成的薄膜稱為醋酸纖維素薄 膜。這種薄膜對蛋白質樣品吸附性小，幾乎能完全消除紙電泳中出現的“拖尾”現象，又因為膜的親水性比較小，它所容納的緩沖液也少，電泳時電流的大部分由樣 品傳導，所以分離速度快，電泳時間短，樣品
一、目的要求學習電泳原理和技術2.學習和掌握SDS－聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳分離蛋白質技術二、原理聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺(acrylamide，簡稱Acr)和交聯劑 N,N-甲叉雙丙烯酰胺(N，N—methylene-bisacylamide，簡稱Bis)在加速劑N，N，N，N—四甲基乙
聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺（acrylamide，簡稱Acr）和交聯劑又稱為共聚體的N, N-甲叉雙丙烯酰胺（methylene-bisacrylamide，簡稱Bis）在加速劑和催化劑的作用下聚合交聯成三維網狀結構的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳簡稱PAGE）。與
（二）凝膠電泳以淀粉膠、瓊脂或瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等作為支持介質的區帶電泳法 稱為凝膠電泳。其中聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）普遍用于分離蛋白質及較小分子的核酸。瓊脂糖凝膠孔徑較大，對一般蛋白質不起分子篩作用，但適用于分離同
六、SDS-PAGE1.SDS及SDS-PAGE（1）SDS：十二烷基硫酸鈉（sodium decyl sulfate，SDS），一種陰離子去污劑，它能以一定的比例和蛋白質結合，形成一種SDS—protein的復合物。（2）SDS- PAGE：具有SDS的PAGE，分離SDS—protein復合物，
⒈材料與試劑 醋酸纖維素膜一般使用市售商品，常用的電泳緩沖液為pH8.6的巴比妥緩沖液，濃度在0.05-0.09mol/L。⒉操作要點⑴膜的預處理：必須于電泳前將膜片浸泡于緩沖液，浸透后，取出膜片并用濾紙吸去多余的緩沖液，不可吸得過干。⑵加樣：樣品用量依樣品濃度、本身性質、染色方法及檢測方法等因素決
以淀粉膠、瓊脂或瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等作為支持介質的區帶電泳法稱為凝膠電泳。其中聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）普遍用于分離蛋白質及較小分子的核酸。瓊脂糖凝膠孔徑較大，對一般蛋白質不起分子篩作用，但適用于分離同工酶及其
有三種常用的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳方法：blue native（BN-PAGE），clear native（CN-PAGE），quantitative preparative native continuous（QPNC-PAGE）。在一個典型的native PAGE方法中，復合物被CN-PA
實驗概要免疫印跡是利用聚丙烯酰胺凝膠電泳來檢測樣品或提取物中某種特定蛋白的方法。聚丙烯酰胺凝膠緊貼著膜放置，在電流的作用下蛋白質從凝膠遷移到膜上并且被固定，常用的膜是硝酸纖維素或 PVDF（聚偏乙烯氟化物）。膜是凝膠蛋白質的復制品，然后可以與抗體結合后進行染色。實驗步驟1.
陳華 ，劉樹滔 ，溫騰 ，原山武 ，久保田英博 ，饒平凡(1．福州大學生物工程研究所，福建福州350002；2．日本ATI''''O公司技術開發部，東京113—8425)摘要：對第一向為載體兩性電解質pH梯度等電聚焦雙向電泳(Iso—DALT)中若干影響分離效果的實驗