詳述PCR儀的操作使用說明和注意事項
PCR儀操作使用說明:(一)試劑PCR儀1.引物:決定擴增的特異性。根據檢測的DNA不同,選用不同引物,每種病原微生物都有自己特異的引物。2.耐熱的DNA聚合酶:此酶是從耐熱細菌中分離出來的,能耐受高溫90℃-100℃。3.10×PCR緩沖液:500mmol/l KCl;100mmol/L Tris-HCl(pH8.4,20℃)150mmol/L MgCl2,1mg/ml明膠。10×PCR緩沖液隨酶一起購買。4.5mmol/L dNTP貯備液:將dATP、dCTP、dGTP和dTTP鈉鹽各100mg合并,加入滅菌去離子水溶解,用NaOH調pH至中性,分裝每份300μl,-20℃保存。dNTP濃度zui好用UV吸收法精確測定。現用dNTP溶液均有商品化產品。5.DNA模板:用處理液將待測標本處理,不同處理方法、操作各異,但目的是暴露標本中被檢測的DNA。(二)操作程序PCR儀過去標準的PCR操作程序是將PCR儀必需反應......閱讀全文
PCR簡介/PCR儀
PCR的要素基本的PCR須具備PCR儀圖冊1.要被復制的DNA模板 Template2.界定復制范圍兩端的引物Primers.3.DNA聚合酶Taq. Polymearse4.合成的原料(四種脫氧核苷酸)及水。 PCR儀工作原理利用升溫使DNA變性,在聚合酶的作用下使單鏈復制成雙鏈,進而達到基因復制
普通PCR儀/梯度PCR儀/實時熒光定量PCR儀/原位PCR儀應用對比
PCR:聚合酶鏈式反應。是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的最大特點,是能將微量的DNA大幅增加。 PCR原理示意圖: 1589863475231958.jpg PCR儀的種類有:常規的普通PCR儀,梯度P
普通PCR儀/梯度PCR儀/實時熒光定量PCR儀/原位PCR儀應用對比
PCR:聚合酶鏈式反應。是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的最大特點,是能將微量的DNA大幅增加。PCR原理示意圖:PCR儀的種類有:常規的普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR儀,實時熒光定量PCR儀四類!1、普通PCR儀一般把一次PCR
PCR儀
簡單的說,PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。目前常用的技術,可以將一段基因復制為原來的一百億至一千億倍。根據DNA擴增的目的和檢測的標準,可以將PCR儀分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR儀,實時熒光定
普通PCR梯度PCR 原位PCR 熒光定量PCR儀的區別
普通PCR儀: 一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,稱之為普通PCR儀,也就是傳統的PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。如;(ABI 2720) 梯度PCR儀: 一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)的稱
原位PCR儀
用于從細胞內靶DNA的定位分析的細胞內基因擴增儀,如病源基因在細胞的位置或目的基因在細胞內的作用位置等。是保持細胞或組織的完整性,使PCR反應體系滲透到組織和細胞中,在細胞的靶DNA所在的位置上進行基因擴增,不但可以檢測到靶DNA,又能標出靶序列在細胞內的位置,于分子和細胞水平上研究疾病的發病機理和
PCR擴增儀
聚合酶鏈鎖反應,Polymerase chain reaction,簡稱PCR,是一種分子生物學技術,用于擴增特定的DNA片段,這種方法可在生物體外進行,不必依賴大腸桿菌或酵母菌等生物體。PCR這項技術,被廣泛地運用在醫學和生物學的實驗室,例如用于判斷檢體中是否會表現某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診
原位PCR儀
用于從細胞內靶DNA的定位分析的細胞內基因擴增儀,如病源基因在細胞的位置或目的基因在細胞內的作用位置等。是保持細胞或組織的完整性,使PCR反應體系滲透到組織和細胞中,在細胞的靶DNA所在的位置上進行基因擴增,不但可以檢測到靶DNA,又能標出靶序列在細胞內的位置,于分子和細胞水平上研究疾病的發病機
PCR儀實現
1985年美國PE-Cetus公司人類遺傳研究室的Mullis 等發明了具有劃時代意義的聚合酶鏈反應。其原理類似于DNA的體內復制,只是
梯度PCR儀
把一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),通常有12種溫度梯度,這樣的儀器就叫梯度PCR儀。因為被擴增的不同DNA片段,其最適退火溫度是不同的,通過設置一系列的梯度退火溫度進行擴增,從而一次性PCR擴增,就可以篩選出表達量高的最適退火溫度,進行有效的擴增。主要用于研究未知DNA