9. 問：選擇哪個物種用于免疫接種?
答：使用IgG (兔、山羊)和IgY(雞)抗體針對同一抗原的優勢：
----獨立確認預期的目標蛋白質被檢測。
——抗體庫具有不同的特性，在不同的技術中能起到互補的作用(免疫印跡、免疫沉淀反應等)雙重染色。
----一般從遺傳角度上選擇與抗原有較遠的親源關系的物種用于免疫接種 (如母雞非常適合生產保守序列的哺乳動物蛋白質)。找到更多關于IgY信息。
10. 問：在我開始實驗前可以測試來源于一些動物的免疫前血清或卵黃嗎?
答：按照您的要求，在您開始您的實驗前Agrisera會送你幾個免疫前血清或卵黃樣品。您可以選擇具有最低背景信號的動物用于測試。
11. 問：在兔子中生產的抗體比那些在雞中生產的更好嗎?
12. 答：生產抗體的過程是抗原，特異動物免疫反應和測試的結合。如哺乳動物的保守靶標蛋白，我們推薦使用在雞中生產的抗體。
因為他們在進化上親緣關系更遠，且他們的免疫系統與保守的哺乳動物蛋白反應更好，而這些保守哺乳動物蛋白可能不會被山羊或兔子的免疫系統識別。
13. 問：我定制了一個抗體。我怎么知道定做的抗體能識別正確的蛋白質?
答：首先用間接的ELISA分析做確認，ELISA板上用動物免疫反應的蛋白質或多肽包被，把血清加入板中孵育，隨后二抗發出信號。這是第一個證據能說明免疫動物產生的抗體能識別目標蛋白或肽。然而，這個結果可能與在自然組織中檢測到的水平不直接對應。ELISA板上包被了很好的暴露的多肽或蛋白質，在只含有少數細胞的自然組織蛋白中可能不會發生。因此，測試包括收集已知或我們猜測能正確表達目標蛋白的材料。另外也包括以缺失或過表達突變體提取物為對照的測試。在免疫印跡中使用重組蛋白作為對照，可能會為我們提供一些信息，但在某些情況下，
產生的抗體只識別重組蛋白而不識別天然的蛋白質。另一個風險是，我們的膜暴露的時間太短，使得只能顯示出重組蛋白的信號。考慮特定組織的表達水平，遵循一定的發展模式，有些蛋白質難以檢測。為了測試的成功所有這些因素都必須考慮在內。
14. 問：如果我的抗體在免疫定位試驗中成功了，是否該抗體在免疫印跡和其它的試驗中也能用呢?
答：再次強調，它取決于抗體識別蛋白質的哪一部分和在固定后或免疫印跡后蛋白的哪一部分暴露了。如果多克隆抗體是合成肽，它能識別抗原池，如果這類抗原固定后沒有暴露----抗體將不會識別抗原。在某些情況下在緩沖液中加入6 - 8 M尿素有助于蛋白質的暴露。
15. 問： 可以獲得多少血清或雞蛋?
答：山羊：200毫升血清/月
兔子：50毫升血清/月
母雞： 25個蛋/每月
16. 問：如何儲存抗體？
答：血清中的抗體，對于抗體這是一個非常穩定的存儲形式。在-20°C或-70°C的血清通常可以保存多年。在一些特殊的情況下，
anti-peptide抗體儲存的時間更短。短時間可以儲存在4°C。在某些情況下操作要更加小心，第一步在-20°C冷凍，之后放于-70°C冷凍的效果更好。
總IgG片段（IgG蛋白經過蛋白G基質純化后），一般抗體以這種形式是穩定的。他們能夠儲存在-20°C或-70°C達數年之久。對于短期使用時可加入疊氮化鈉（終濃度為0.02 %）或其他防腐劑。
總IgY片段（IgY抗體從卵黃中提取和純化的抗體），純化的IgY片段在室溫下時非常穩定的（盡管我們不推薦室溫作為儲藏條件）。IgY能夠在含有0.02%的疊氮化鈉（注意：疊氮化鈉抑制HRP的活性）下或50
ug/ml硫酸慶大霉素的條件下儲存在4°C。要避免IgY凍融或儲存在干冰環境下，IgY能直接儲存在-20°C。
參考文獻："The IgY preparations were stable over time. No loss of antigen
recognition was observed after storage for 3 years at + 4°C". F.De
Ceunick et al. Journal of Immunological Methods 252 (2001) 153-161.
卵黃中的卵黃抗體需要在含0.02%疊氮化鈉（注意：疊氮化鈉抑制HRP的活性）或含50 ug/ml硫酸慶大霉素 的條件下儲存于4°C。卵黃不要冷凍儲藏，否則這會使得純化抗體非常困難，經過6個月儲存后純化卵黃中的抗體將會變得更加的困難。
親和純化抗體：
最脆弱的抗體，應該小心考慮存儲條件，實驗上檢查每一個抗體。針對不同抗原表位的親和純化抗體其穩定性不同。有些會在純化后直接沉淀，活性仍然存在。對于一個給定的抗體很難提前預測儲存條件-----有一些可選的方案用于測試：
-20°C或-80°C
- 4°C+疊氮化防腐劑(0.02%)或硫柳汞
-20°C+甘油;甘油終濃度10或50%
-20°C+BSA終濃度為0.05 -0.5%
IgG
哺乳動物，多克隆抗體親和純化后沉淀，可能直接沉淀或冷藏過夜后沉淀。一些抗原能夠刺激產生一類IgG，這被稱為冷球蛋白，意味著他們將在冷條件下沉淀。然而，加熱到室溫可以解決這個問題。抗體溶解后可以通過離心去除沉淀。
IgY
雞抗體也會在過夜冷凍儲存后或幾周后沉淀。加熱到室溫經常幫助那些沉淀溶解。否則，使用前IgY溶液需要先經過離心后去沉淀再使用。
抗體溶液無防腐劑儲存，有著被細菌污染的風險，這通常是最常見的蛋白質失活的原因。
常規建議：
----對于較大體積的親和純化抗體，濾滅的抗體樣本和分成等份的液體避免多次凍融。
----存儲蛋白質的濃度在0.5 - 1 mg/ml。
----檢查蛋白質在不同儲存條件下的穩定性，尤其是IgM。
重要提示：
疊氮化鈉將抑制辣根過氧化物酶的活性及干擾抑制一些耦合方法和生物測定。然而，在ELISA或WB實驗中制備IgY(含0.02%疊氮化鈉)作為一抗稀釋到1：2000倍時，疊氮化鈉的含量會因稀釋而不影響實驗。在抗體溶液中也可以選擇其它試劑來防止細菌生長：
----0.01%硫柳汞
----50微克/毫升硫酸慶大霉素
