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  • 發布時間:2019-03-05 12:08 原文鏈接: Biochrom分光光度計測定核酸的濃度

            DNA或RNA鏈上堿基的苯環結構在紫光區具有較強吸收,其吸收峰在260nm處。波長為260nm時,DNA或RNA的光密度OD260不僅與總含量有關,也隨構型而有差異。

    對標準樣品來說,濃度為1μg/ml時,DNA鈉鹽的OD260=0.02。當OD260=1時,DNA濃度約為50μg/ml;RNA濃度約為40μg/ml;寡核苷酸濃度約為33μg/ml。

        當DNA樣品中含有蛋白質、酚或其他小分子污染物時,會影響DNA吸光度的準確測定。一般情況下同時檢測同一樣品的OD260、OD280和OD230,計算其比值來衡量樣品的純度。

        核酸純度判定(經驗值):
        純DNA:OD260/OD280≈1.8(>1.9,表明有RNA污染;<1.6,表明有蛋白質、酚等污染) 
        純RNA:1.7<OD260/OD280<2.0(<1.7時表明有蛋白質或酚污染;>2.0時表明可能有異硫氰酸殘存)

        計算待測樣品的濃度:
        DNA樣品的濃度(μg/μl):OD260×稀釋倍數×50/1000
        RNA樣品的濃度(μg/μl):OD260×稀釋倍數×40/1000

        使用Biochrom分光光度計,設定參數后,可實現直接獲取核酸的濃度、OD260/OD280等多個數值,從而對樣品有一個全面的判定。


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