DNA測序PCR測序反應

　　1. 取0.2 ml的PCR管，用記號筆編號，將管插在顆粒冰中，按下表加試劑：

　　所加試劑 測定模板管 標準對照管

　　BigDye Mix 1 μl 1 μl

　　待測的質粒DNA 1 μl －

　　pGEM-3Zf (+) 雙鏈DNA － 1 μl

　　待測DNA的正向引物 1 μl －

　　M13(-21)引物 － 1 μl

　　滅菌去離子水 2 μl 2 μl

　　總反應體積5 μl，不加輕礦物油或石蠟油，蓋緊PCR管，用手指彈管混勻，稍離心。

　　2. 將PCR管置于9600或2400型PCR儀上進行擴增。98℃變性2 min后進行PCR循環，PCR循環參數為96℃ 10 s，50℃ 5 s，60℃4 min，25個循環，擴增結束后設置4℃保溫。