EB病毒轉化成淋巴細胞

全血

刀豆凝集素A

RPMI 生長培養基 離心管

1. 混合 10 ml 全血和 10 ml RPMI 生長培養基。

生長培養基（RPMI1640 800 ml，FBS 200 ml，2 mmol/L-谷氨酰胺，5 μg/ml 兩性霉素，50 μg/ml 慶大霉素）

2. 取 15 ml 無菌離心管，加 3 ml Histo-paque1077（Sigma），在其上加 4 ml 稀釋血，分離淋巴細胞。

3. 室溫 300 g 離心 30 分鐘，棄上層清亮血漿。

4. 收集不透明淋巴細胞層，細胞懸液倒入 50 ml 無菌離心管。

5. 20 ml RPMI 1640 生長培養基洗兩次，室溫 300 g 離心 10 分鐘。

6. 10 ml 血分離的細胞懸于 1.0 ml 含 EB 病毒的上清。

7. 細胞懸液（1.0 ml）放入 25 cm² 組織培養瓶，垂直放置，37℃ 5% CO₂ 孵育 1~3 小時。

8. 孵育后，加入 3 ml 含 0.2 μg/ml 刀豆凝集素A 的 RPMI 1640 生長培養基，水平放置，使細胞均勻分布于全生長面。

9. 每周加 1 ml 含刀豆凝集素A 的新鮮 RPMI 1640 生長培養基，不要吸出原培養基。