ELISA是一種經典的測定液體樣本中蛋白含量的方法。
該方法優點在于可以準確定量蛋白含量,且測定樣本的種類可以多種多樣。本期小編帶你一起了解ELISA不同樣品的制備方法。
細胞培養上清液
移取細胞培養基至離心管中,4℃ 下以 1500 rpm 的速度離心 10 分鐘。
立即分裝上清液,并將樣品儲存在 -80℃ 下。盡量減少凍融循環。
細胞提取物
將組織培養板置于冰上。
吸取培養基,并小心地用冰冷的 PBS 清洗細胞一次。
吸取 PBS,每 100 mm 孔板加入 0.5 mL 完全提取緩沖液。
刮取細胞收集在傾斜的孔板中,并移至預冷的試管內。
短暫渦旋,冰上孵育 15-30 分鐘。
4℃ 下以 13 000 rpm 的速度離心 10 分鐘,沉淀不溶性內容物。
將上清液(即可溶性細胞提取物)等分,置于冰上清潔冷凍管,并將樣品儲存在 -80℃ 下。盡量減少凍融循環。
條件培養液
將細胞置于完全(含血清)生長培養基中,使細胞增殖至所需的融合水平。
去除生長培養基,并非常小心地用幾毫升溫 PBS 清洗。重復清洗步驟。
去除最后一次 PBS 洗液,小心地加入無血清生長培養基。
孵育 1-2 天。
移取培養基至離心管中,4℃ 下以 1500 rpm 的速度離心 10 分鐘。
立即分裝上清液,并將樣品儲存在 -80℃ 下。盡量減少凍融循環。
牛奶
采集樣品,4℃ 下以 10 000 x g 離心 2 分鐘。
分裝上清液并將樣品儲存在 -80℃ 下。盡量減少凍融循環。
血漿