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  • 發布時間:2019-04-26 20:16 原文鏈接: FACSAnalysisofESCells

    • Isolate cells and dissociate to single cell suspension (can use Gibco Cell Dissociation Buffer, Accutase or Trypsin)

    • Wash with 10% FBS/DMEM:F12

    • For surface markers, resuspend in appropriate volume of 10% FBS/DMEM:F12 and keep on ice.

    • For intracellular markers, resuspend in 1ml 4% paraformaldehyde/PBS and incubate for 10min at room temperature

    • Wash with 10% FBS/DMEM:F12

    • Resuspend in 0.1% Triton X-100/PBS and incubate for 15min on ice

    • Wash with 10% FBS/DMEM:F12

    • Resuspend in an appropriate volume of 10% FBS/DMEM:F12 and keep on ice

    • Add 50μl cell suspension to 50μl 10% FBS/DMEM:F12 containing appropriate amount of antibody to give the final concentration listed below and incubate for 30min to 1 hour

    • Wash twice with 10% FBS/DMEM:F12

    • Resuspend in 100μl of 10% FBS/DMEM:F12 containing secondary antibody (AlexaFluor 488 conjugate) at 1:100

    • Incubate for 30min

    • Wash twice with 10% FBS/DMEM:F12

    • Resuspend in appropriate volume of 10% FBS/DMEM:F12


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