FastDNA試劑盒及具體實驗流程步驟

FastDNA 試劑盒可從廣闊的各種來源中快速有效地分離出 genomic DNA，配套 FastPrep 儀器使用。動植物組織、細菌、海藻、真菌和其他許多標本，在 40 秒內容易被裂解。這個 benchtop 設備是一種ZL性的垂直角度運動，這種運動使得裂解微粒能同時從多方向、同步地碰撞。

FastPrep 儀器提供一種極其快速、有效、高度可重復勻質化，超過了用酶消化、超聲破碎儀、渦旋、混合傳統提取方法。標本放在裝有 Lysing Matrix A 的 2.0 ml 試管中。同時幾乎全部的標本很容易用預先填充化合物進行加工，另外，1/4 英尺的陶球用來加工堅硬的標本，比如：骨頭、軟骨和種子。在有 CLS 專樣下,用 Lysing Matrix A 處理,在 FastPrep 儀器中將會勻漿化。對植物組織來說, CLS-VF 用來和 PPS 連用。酵母、海藻和真菌在CLS-Y 中被裂解。CLS-TC 是用來裂解其他所以標本。為了獲得最大的柔韌性，試劑會提供所有的緩沖液。裂解之后，標本被離心到 pellet debris 和 lysing matrix。通過硅土基質 GENECLEAN 程序 DNA 被純化。提取的 DNA 準備用來消化、電泳、PCR 和其他任何期望的用途。

適用研究范圍：

動植物組織、細菌、酵母、藻類和真菌中分離基因組試劑盒 

試劑盒組成：

 
實驗者需自備的儀器及耗材
FastPrep? Instrument （fastprep 儀器）
Microcentrifuge that can freely spin 2.0 ml tubes （可裝載 2.0ml 管子的離心管） Microcentrifuge tubes (2.0 ml and 1.5 ml) （可裝載 1.5 和 2.0ml 管子的微型離心管） Rotator or low-speed vortex
(Optional) SPIN Filters and Catch Tubes, 100
 
操作步驟
1. 添加標本到 Lysing Matrix A 管中。
在水中或者是等滲鹽溶液中，放置 100-200 mg 組織（新鮮、冰凍、干燥等）或者200μl細胞懸浮
液。對于細菌、酵母、海藻、或者是組織培養細胞是在懸浮液中生長，離心充足的培養體積，以便提供 50-100 mg 濕重的小球尺寸的標本。（在水或者等滲鹽溶液中重新懸浮小球，獲得 200 μl 的最大懸浮體積。）
 
2. 根據下表添加適當的 CLS。 

3. 在 FastPrep 儀器中用 6.0 設置的速度勻質化 40 秒鐘。

4. 以 14,000 轉離心 5-10 分鐘到 pellet debris。

5. 轉移 600 --700μl 的懸浮液到一支 2.0 ml 微型離心管，加同等體積的Binding Matrix， 顛倒混勻。
注釋：在和下步之間，全部體積的完全混合，使用一支足夠大的試管來提供空間是很重要的。不建議使用圓錐底的試管。在這步一支 2.0 ml 微型離心管就足夠了。

6. 在室溫的條件下，攪拌器一般攪拌 5 分鐘進行孵育。 
注釋：一臺低速的旋渦機在這步可以用，但是操作必須小心，以免除去 DNA。

7. 在 14,000 轉離心 10 秒鐘到pellet Binding Matrix，去除上清液（懸浮液）。

8. 添加 500μl 備好的 SEWS-M，用吸量管輕輕地吹動液體的力量使小球重新懸浮。
注釋：確保酒精加到濃縮的，參看 3.1 部分。

9. 14,000 轉離心 1 分鐘，去除上清液。
注釋：用旋轉式移液器轉移重新懸浮的Binding Matrix 到另一只旋轉式移液器。用 14,000 轉離心 1 分鐘，去除槍頭管里的物質。

10. 用 14,000 轉離心 10 秒鐘，用小的吸量管移動剩余液體。
注釋：如果用一支，用 14,000 轉離心第二次，用新的干凈的試管替代 the Catch Tube。 

11. 在 100μl 的 DES 中，通過輕輕地重新懸浮的Binding Matrix 洗提 DNA。
 
12. 用 14,000 轉離心 1 分鐘，轉移洗提的 DNA 到干凈的微型離心管中。DNA 可為下游應用作準備。為延長有效期將它存儲在-20°C 或者是 4°C，直到使用。
注釋：用一支吸量管小心轉移DNA，以避免轉移帶有洗提 DNA 的 Binding Matrix 微粒，避免 shearing。注釋：用 SPIN 移液器，在 14,000 轉離心 1 分鐘，將洗提的DNA 放入干凈的catch tube。DNA 可為下游應用作準備。為延長有效期將它存儲在-20°C 或者是 4°C，直到使用。