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  • 發布時間:2021-07-27 13:42 原文鏈接: GFP綠色熒光蛋白的檢測方法有哪些

    檢測方法:
    1、實驗準備
    ? Modulus單管型多功能檢測儀
    ? Blue熒光模塊(P/N 9200-040)
    ? 微量適配器(P/N 9200-928)
    ? 純化的rAcGFP1蛋白(Clontech,NO.632502)
    ? 200ul加樣器與20ul加樣器
    ? TE Buffer (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0)
    ? 1.5ml離心管
    2、.儀器準備

    2.1 關閉Modulus的電源,為Modulus插入BLUE熒光檢測模塊.
    2.2 打開Modulus的電源,儀器預熱1min
    2.3 按照說明插入微量適配器

    3.、制備標準曲線

    3.1 對rAcGFP1進行系列稀釋
    3.2 在微量比色杯中加入100ul的rAcGFP1稀釋后溶液。注意:避免在微量比色杯中出現氣泡,負責會引起檢測誤差。.
    3.3 將微量比色杯插入到微量適配器中,點"Measure Fluorescence Raw."檢測
    3.4 記錄檢測結果,對其他樣品重復4.2-4.3的步驟
    3.5 利用熒光值(FSU)與樣品濃度做出標準曲線

    4、 校準

    4.1 使用Modulus檢測未知樣品前,你可以使用rAcGFP1稀釋液來校準Modulus儀器
    4.2 使用表1中的5個稀釋液來校準Modulus。選擇"ng/μL"作為測量單位,使用0 ng/μL 作為空白標準;為了盡可能準確,使用接近實際樣品的稀釋液做其他幾個點的校準。
    4.3 保存校準,可供以后調用 (可選).
    4.4 使用"Measure Fluorescence."開始檢測未知樣品。注意:在校準后就無需再做標準曲線。
    4.5 樣品濃度將直接在屏幕上顯示.

    簡介:
    綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)是一類存在于腔腸動物體內的生物發光蛋白。1962年Shimomura等首先從多管水母(Aequoria victoria)中分離出一種分子量為20kD的稱為Aequorin的蛋白。由于水母整體熒光及提取的蛋白質顆粒熒光都呈綠色,因此,人們將這種蛋白命名為綠色熒光蛋白。
    GFP具有多種優點:易于檢測,靈敏度高;熒光性質穩定,耐受性強;易于表達,無細胞毒性;可用于活細胞檢測。因此,GFP可作為報告基因用于檢測基因表達或調控,或作為融合標簽來檢測蛋白質分子的定位、遷移、構象變化以及分子間的相互作用,或者靶向標記某些細胞器

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