HLA分型技術（一）

  HLA分型并不只是一種應用性的臨床檢測指標，免疫遺傳學研究的發展，很大程度上依賴于以分型為主要手段的HLA多態性分析。60年代建立的并不斷完善的血清學及細胞學分型技術主要側重于分析HLA產物特異性；80年代起建立的DNA分型方法則側重于基因的分型。

　　一、血清學分型技術

　　（一)HLA-Ⅰ類抗原的檢測

　　HLA-A、B、C抗原型別鑒定均借助微量淋巴細胞毒試驗（microlymphocytotoxicitytest)或稱補體依賴的細胞毒試驗（complement dependent cytotoxicity test)。原理為取已知HLA抗血清加入待測外周血淋巴細胞，作用后加入免補體，充分作用后加入染料，在倒置顯微鏡下判斷結果，著染的細胞為死亡細胞，表示待檢淋巴細胞表面具有已知抗血清所針對的抗原。標準抗原清取自多次經產婦或計劃免疫志愿者。

　　（二)HLA-DR、DQ抗原檢測

　　該二抗原分型方法同HLA-Ⅰ類抗原，但所用抗血清須經過血小板吸收以去除針對Ⅰ類抗原的抗體。另外，待測細胞須是經純化的B細胞。醫.學.全.在線.網.站.提供

　　血清學分型是一項古老的技術，雖然近年來已建立許多新的分型技術，但血清學方法目前仍是HLA分型的基礎。

　　二、細胞學分型技術

　　HLA-Dw特異性與HLA-DP特異性可分別通過純合分型細胞（homozygote typing cell,HTC)及預致敏淋巴細胞試驗（primed lymphocyte test,PLT)檢測。二種方法的基本原理均是判斷淋巴細胞在識別非已HLA抗原決定簇后發生的增殖反應。由于分型細胞來源困難以及操作手續繁瑣，細胞學分型技術下正逐漸淘汰。

　　三、HLA的DNA分型技術

　　上述傳統的HLA分型方法有許多不足之處，近年來國內外已將HLA分型技術由抗原水平發展到基因水平。

　　（一)限制性片段長度多態性檢測技術

　　這是首先建立的對多態性進行檢測的DNA分析技術。個體間抗原特異性來自氨基酸順序的差別，后者由編碼基因的堿基順序不同所決定。這種堿基順序的差別造成限制性內切酶識位置及酶切位點數目的不同，從而產生數量和長度不一的DNA酶切片段。用特異性探針對整個基因組DNA酶切片段進行雜交，即可分析限制性長度片段多態性（restriction fragment length polymorphism,RFLP)。一定的內切酶組合所得到的HLA-RFLP可以和傳統方法測定的HLA特異性型別相關。80年代末發展起來的PCR（polymerase chain reaction)技術已被用于RFLP分析，即用等位特異限制酶裂解PCR擴增的片段，然后再進行分析，從而大提高了靈敏度。