HPLC法測定保健食品中蘆薈的含量

1 范圍

本標準規定了保健食品中蘆薈苷的高效液相色譜測定方法。

本標準適用于以蘆薈和加工產品為原料的保健食品中蘆薈的含量測定。

2 原理

以甲醇和水（55+45）為溶劑，用高效液相色譜c18柱分離，在293nm波長下檢測。蘆薈苷的保留時間為定性，峰面積為定量。

3 試劑和材料

除另有說明外本方法所用試劑為分析純凈水水為GB/T 6682規定的一級水。

3.1 試劑

3.1.1甲醇（CH3OH）：色譜純度。

3.1.2石油醚：沸程30℃～60℃。

3.2 標準品

蘆薈苷標準品（C21H22O9）。

3.3 標準溶液的配制

3.3.1蘆薈苷標準儲備液：稱取10.00 mg蘆薈苷標準品于25 ml容量瓶中加流動相溶解定容至刻度搖勻。

3.3.2蘆薈標準溶液：蘆薈苷標準保留液分別以0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL至10 mL體積瓶吸收，濃度分別為20μ·mL、40μg·mL、80μg/mL、160μ/mL、240μg/mL。蘆薈苷標準溶液濃度分別為20μ/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μ/mL和240μg/mL。

4 儀器設備

4.1高效液相色譜儀：帶有紫外探測器或二極管陣列檢測器。

4.2 超聲波清洗器。

4.3分析平衡：靈敏度1毫克，0.1毫克。

4.4離心機：轉速（>3000 r/min）。

4.5微孔濾膜：0.45。米

5 分析步驟

5.1 試樣制備

5.1.1 固體試樣

稱取1g樣品（精確至0.001 g），并均勻混合。在塞錐瓶中加入50.0ml流動相。稱取液體并用超聲波處理10分鐘。用流動相補償失重，均勻搖動。濾液用0.45um微孔膜過濾，并對濾液進行測定必要時適當稀釋。

5.1.2含油基質試樣

稱取試樣1g（精確至0.001 g），向塞錐瓶中加入25.0ml石油醚。渦旋使油醚液體充分混合、過濾和廢棄。用少量石油醚清洗錐形瓶和濾紙。將濾紙和殘渣放入原塞錐瓶中，加入50.0ml流動相，稱重，超聲處理10分鐘，冷卻，填充流動相。失重后搖勻，用0.45um微孔膜過濾。要測量濾液。必要時適當稀釋。

5.1.3 水性液體試樣

必要時，上清液用流動相稀釋離心。上清液經0.45微孔膜過濾。

5.2色譜參考條件

5.2.1色譜柱：C18柱，柱長度250mm，內徑4.6mm，粒徑5。mμm或等效性能。

5.2.2流動相：甲醇+水=55+45。

5.2.3流速：1 mL/min。

5.2.4柱溫：40℃。

5.2.5檢測波長：293 nm。

5.2.6進樣量：10 μL。

5.3 標準曲線的制作

將標準系列溶液（3.3.2）注入高效液相色譜（hplc）中，測定相應的峰面積以標準工作液濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線。

5.4 試樣溶液的測定

將樣品溶液(5.1.1，5.1.2，5.1.3)注入液相色譜儀，保留時間為定性，記錄峰面積，根據標準曲線測定樣品溶液(樣品溶液高效液相色譜儀)中蘆薈的濃度。

6 結果計算

試樣中蘆薈苷含量按式（1）計算：

Ci×V ×100

Xi = ..........................................（1）

m×1000

式中：

xi樣品中蘆薈苷的含量以g/100g或g/100ml為單位。

用標準曲線確定的CI_確定樣品溶液中的蘆薈濃度，單位為mg/mL；

用v測量的樣品溶液的體積以毫升（ml）為單位。

(A)以克(G)或毫升(毫升)計的m樣本的樣本質量；

100——單位轉換；

1000——單位轉換。

計算結果用在重復條件下獲得的兩個獨立測量值的算術平均值表示并保留三個有效數字。

7 精密度

在重復性條件下獲得的兩個獨立結果絕對差值不超過算術平均值的10%。

8 其他

當樣品重量為1g體積為50ml時蘆薈苷的定量限為0.0046g/100g。