HPLC法測定飲料中的鄰苯二甲酸酯

圖1.  標準品色譜圖

本文采用高效液相色譜法對某飲料中的鄰苯二甲酸酯的含量進行了測定。鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸二（2-乙基己）酯和鄰苯二甲酸二辛酯在5~100 μg/ml的濃度范圍內線性良好，加標回收率在75%以上。結果表明RIGOL L-3000高效液相色譜儀充分滿足方法對系統適應性的要求，檢測結果精準可靠，重現性好。

塑化劑在工業生產里有著廣泛的應用，它是塑料改性劑的統稱，用來提高塑料強度。鄰苯二甲酸酯類可增強塑料的可塑性和柔軟性，在這次塑化劑風波中的鄰苯二甲酸二（2-乙基己）酯也屬于鄰苯二甲酸酯類。而起云劑則是我們常說的乳化穩定劑，主要用于飲料、奶制品等。常見的原料是阿拉伯膠、乳化劑、棕櫚油等。本次事件就是不法廠商用塑化劑取代了成本更高的棕櫚油。

實驗部分

儀器與試劑

RIGOL L-3000高效液相色譜儀（包括：RIGOL L-3120溶劑組織器、L-3220二元高壓梯度泵、L-3300自動進樣器、L-3400柱溫箱以及L-3500紫外-可見檢測器）；RIGOL C18色譜柱（250mm*4.6mm*5μm）甲醇（Fisher公司，色譜純）；鄰苯二甲酸二乙酯（阿拉丁公司，分析純）；鄰苯二甲酸二丁酯（阿拉丁公司，分析純）；鄰苯二甲酸二（2-乙基己）酯（阿拉丁公司，分析純）；鄰苯二甲酸二辛酯（阿拉丁公司，分析純）

圖2.  某飲料樣品色譜圖。

試樣制備

1.鄰苯二甲酸酯的標準曲線

精確稱取鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸二（2-乙基己）酯和鄰苯二甲酸二辛酯，配制成濃度分別為1mg/ml的標準儲備液備用。

圖3.  某飲料樣品加標回收色譜圖。

分別精密移取5ml、2.5ml、1ml、0.5ml、0.25ml標準儲備液至25 ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，作為標準溶液，其濃度分別為：100μg/ml、50μg/ml、20μg/ml、10μg/ml、5μg/ ml。

2.樣品的制備

精密移取1ml某飲料至10ml容量瓶中，用正己烷/甲醇（1/2）溶液定容至刻度，超聲30 min，用氮吹儀吹干后再用1ml 100%甲醇溶解，用0.45μm濾膜過濾后待用。

表1.   HPLC分析的梯度洗脫程序

精密移取1ml某飲料至10 ml容量瓶中，加入0.35 ml的100 μg/ml的標準溶液，用正己烷/甲醇（1/2）溶液定容至刻度，超聲30 min，用氮吹儀吹干后再用1 ml 100%甲醇溶解，用0.45 μm濾膜過濾后待用。

色譜條件

色譜柱：RIGOL Compass C18, 5μm, 4.6mm×250 mm；柱溫：40℃；進樣體積：20μL；流速：1.0 ml/min；梯度洗脫程序見表1，運行時間：35 min（包括10 min平衡色譜柱）；檢測波長：275 nm。

表2.  鄰苯二甲酸酯的精確度實驗結果

實驗結果

精密度實驗

采用保留時間定性，在上述色譜條件下，4種鄰苯二甲酸酯類化合物得到較好分離，經單個標準樣品定性，出峰順序依次為：鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸二（2-乙基己）酯和鄰苯二甲酸二辛酯。分離譜圖見圖1。20 μg/ml的標準溶液進樣6次，其保留時間和峰面積的RSD%見表1。

標準曲線

采用外標峰面積法定量，以峰面積對質量濃度進行線性回歸，線性方程、相關系數和檢出限見表3。

表3.  鄰苯二甲酸酯的線性方程、相關系數和檢出限

樣品測試

采用相同色譜條件進行樣品測試，測試結果表明此飲料中沒有檢出鄰苯二甲酸酯類物質。譜圖見圖2。

加標回收

采用相同色譜條件對加標后的樣品進行測試，測試結果表明：鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸二（2-乙基己）酯、鄰苯二甲酸二辛酯的回收率分別為76.2%、86.9%、88.0%和86.8%。色譜圖見圖3。

結語

使用RIGOL L-3000高效液相色譜儀可以快速簡單地測定飲料中鄰苯二甲酸酯的含量。由譜圖可知，四種鄰苯二甲酸酯沒有干擾，可以精確測定其含量。通過加樣回收實驗，測定其回收率為75%以上，定量結果準確可靠。此法為飲料中鄰苯二甲酸酯的含量測定提供了一個快速簡單的方法。