HPLC系統概述

HPLC系統一般由輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器、數據記錄及處理裝置等組成。其中輸液泵、色譜柱、檢測器是關鍵部件。有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線脫氣機、自動進樣器、預柱或保護柱、柱溫控制器等，現代HPLC儀還有微機控制系統，進行自動化儀器控制和數據處理。制備型HPLC儀還備有自動餾分收集裝置。

最早的液相色譜儀由粗糙的高壓泵、低效的柱、固定波長的檢測器、繪圖儀，繪出的峰是通過手工測量計算峰面積。后來的高壓泵精度很高并可編程進行梯度洗脫，柱填料從單一品種發展至幾百種類型，檢測器從單波長至可變波長檢測器、可得三維色譜圖的二極管陣列檢測器、可確證物質結構的質譜檢測器。數據處理不再用繪圖儀，逐漸取而代之的是最簡單的積分儀、計算機、工作站及網絡處理系統。

目前常見的HPLC儀生產廠家國外有Waters公司、Agilent公司（原HP公司）、島津公司等，國內有大連依利特公司、上海分析儀器廠、北京分析儀器廠等。

一、輸液泵

1．泵的構造和性能

輸液泵是HPLC系統中最重要的部件之一。泵的性能好壞直接影響到整個系統的質量和分析結果的可靠性。輸液泵應具備如下性能：①流量穩定，其RSD應＜0.5%，這對定性定量的準確性至關重要；②流量范圍寬，分析型應在0.1~10 ml/min范圍內連續可調，制備型應能達到100 ml/min；③輸出壓力高，一般應能達到150~300kg/cm2；④液缸容積小；⑤密封性能好，耐腐蝕。

泵的種類很多，按輸液性質可分為恒壓泵和恒流泵。恒流泵按結構又可分為螺旋注射泵、柱塞往復泵和隔膜往復泵。恒壓泵受柱阻影響，流量不穩定；螺旋泵缸體太大，這兩種泵已被淘汰。目前應用最多的是柱塞往復泵。

柱塞往復泵的液缸容積小，可至0.1ml，因此易于清洗和更換流動相，特別適合于再循環和梯度洗脫；改變電機轉速能方便地調節流量，流量不受柱阻影響；泵壓可達400kg/cm2。其主要缺點是輸出的脈沖性較大，現多采用雙泵系統來克服。雙泵按連接方式可分為并聯式和串聯式，一般說來并聯泵的流量重現性較好（RSD為0.1%左右，串聯泵為0.2~0.3%），但出故障的機會較多（因多一單向閥），價格也較貴。

各品牌輸液泵的基本參數：

項目 Waters 515型 HP 1100型 LC-10ATvp型 Elite P200 II型 檢定要求

流速范圍 0.001~10 0.001~10 0.001~9.999 0.01~4.99

調節精度 0.001 0.001 0.001 0.01

流量精密度 RSD0.1% 0.15%（<0.3%） 0.3% 0.5% 1.5%

流量準確度   ±2.0% ±5.0% ±2.0%

最高壓力 4000 Psi 40 MPa 39.2MPa 40.0MPa

密封圈壽命    

流動相的脈沖    

2．泵的使用和維護注意事項

為了延長泵的使用壽命和維持其輸液的穩定性，必須按照下列注意事項進行操作：

①防止任何固體微粒進入泵體，因為塵埃或其它任何雜質微粒都會磨損柱塞、密封環、缸體和單向閥，因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相最好在玻璃容器內蒸餾，而常用的方法是濾過，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應經常清洗或更換。