有利于開展蘇丹紅的人體內暴露（血液中蘇丹紅）研 究，可以與外暴露（食品中蘇丹紅）建立聯系，本研究 具有一定科研創新意義。
相關標準
標準溶液的配制
(1)標準儲備液：分別稱取10.0mg的蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標準品，溶于乙腈，定容至100.0mL，得到濃度為100.0mg/L的標準貯備液。
(2)標準系列：取標準儲備液用乙腈稀釋配制成0.40μg/L、2.0μg/L、10.0μg/L、50.0μg/L、100.0μg/L、250.0μg/L的標準系列溶液，進樣前用0.25μm微孔濾膜過濾。
分離檢測條件
標準曲線
系列工作溶液，以濃度為橫坐標，定量離子對峰面積為縱坐標，建立標準曲線，每個濃度測定3次，取平均值。蘇丹紅工作溶液放置避光處。
精密度
選取添加標準品(蘇丹紅Ⅰ~Ⅳ)50.0μg/L，重復測定6次，精密度以相對標準偏差RSD表示。
回收率
在小鼠血液中添加10.0μg/L、50.0μg/L、100.0μg/L，高、中、低3個濃度的標準溶液，樣品處理方法按“二、5”處理，計算回收率。
色譜分離條件的選擇與優化
比較了ZORBAX SB-C8(4.6mm×50mm，3.5μm)和VARIAN Pursuit C18(150mm×4.6mm，5μm)兩種色譜柱的分離情況。實驗結果表明，選用150mm的VARIANPursuit C18柱，分離時間較長，蘇丹紅Ⅲ的出峰時間為35min，且未分離出蘇丹紅Ⅳ。而用ZORBAX SBC8柱，在8min內就能達到較好的分離效果。因此，本研究選擇ZORBAX SB-C8色譜柱作為分離柱。
對于流動相的比例，參照相關文獻的梯度洗脫程序進樣檢測的結果并不比單純采用0.25%甲酸∶乙腈=20∶80等度洗脫的分離效果好，而且等梯度洗脫避免了梯度洗脫基線漂移以及耗時長的缺點。因此，本實驗流動相中水相選擇了0.25%的甲酸水溶液，有機相選擇乙腈。水相與流動相比例為20∶80，色譜圖如圖1所示。
質譜條件的優化
本文選用電噴霧離子源正離子化方式對蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4種物質進行二級質譜分析，為了獲得更高的離子強度，在MRM的模式下采用質譜方法自動優化軟件對質譜條件進行優化，如表2所示。
標準曲線
將系列標準工作溶液按設置好的條件進行檢測，采用外標法定量，以X軸表示樣品濃度(μg/L)，Y軸表示定量離子對峰面積作標準曲線圖，所得標準曲線的相關系數R2均大于0.99，如圖2所示。
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