本方案在E LISA方法中釆用小鼠IL- 1 0特異性的抗體檢測小鼠IL- 1 0 , 不能檢測人或病毒的IL-10。 使用針對其他種屬的抗IL- 1 0 的抗體按照相同的操作流程可以檢測其他種屬的IL-10。 本方法具有高度特異性，對測定樣品中存在的其他細胞因子不敏感。
| 實驗步驟 | 基本方案材 料包被抗體：純化的抗 IL-10 M A b (JES-5-2A 5 鼠 IgGl 抗鼠 IL-10; Phamiingen) PBS
已知濃度的純化的小鼠 IL-10 標準品 R P M M O 完全培養基 待測樣品 封閉液： 1 0 % (W V ) F C S ， P B S 配制，無菌過濾， 4°C 保存 洗滌緩沖液： 0.05% O V V ) Tween 20, P B S 配制，室溫保存 1?2 周 生物素化的二抗（S X C l 抗 鼠 IL-10; Pharmingen) 二抗緩沖液 辣 根 過 氧 化 物 酶（H R P ) 偶 聯 的 鏈 親 和 素（JacksonImmunoresearch # 016-030-084) 底物溶液 終止液：0.2mol/L 檸檬酸鈉，室溫保存 1 2 通道移液器 檢測板： 9 6 孔圓底聚乙浠微孔滴定板（Dynatech， Falcon) 9 6 孔聚苯乙烯微量板 ELISA 板 洗 滌 儀（如 Elcatech 的 Elcawash) 多孔掃描分光光度計（可測雙波長；如 V M A X 、 Molecular Devices) 曲 線 分 析 軟 件（如 Molecular Devices 的 Softmax 或 Biometallics 的 DeltaSoft) 1 . 準 備 1?10/ug/m l 包被抗體， P B S 配制。用 1 2 通道移液器立即在檢測板的每孔中加入 50ul 包被抗體， 37°C 孵 育 30 min。 2.在 9 6 孔聚苯乙烯板中，按如下方法系列稀釋 IL-I O 標準品。加 100M1 R P M I -I O 完全培養基到 B ?G 行 的 第 2 、 3 列 。在 孔 G 2 、 G 3 中 加 入 100M110ng/m l I L -1 0 標準品，混勻，從中吸取 l 〇〇 Ml 加 到 孔 F 2 、 F 3 中。重復一系列的倍比稀釋直到 C 行 ，最后稀釋到孔 C 2 、 C 3 中 取 100^1 丟棄。 B 2 、 B 3 (只加培養基）作為陰性對照。 展開 |
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