實驗材料 IL-8的誘生
試劑、試劑盒 右旋糖酐生理鹽水瓊脂糖淋巴細胞分層液Hank’s液甲醇Wright-Giemsa染液
儀器、耗材 潔凈載玻片 打孔器離心機培養箱
實驗步驟
一、IL-8的誘生
1. 常規分離PBMC，洗滌后，調細胞濃度為5×106/ml。
2. 將細胞接種于24孔細胞培養板，每孔0.5 ml。
3. 加誘生劑LPS（20 ug/ml），每孔0.5 ml，37度，5%CO2孵育48 h。
4. 離心收集細胞培養上清液，用HCl溶液調為酸性（pH4.0），經SephadxG-75柱分離，收集活性組分即為待測的IL-8粗品。
二、IL-8的生物活性檢測
1. 瓊脂板的制備；取溶化后50度左右保溫的2%瓊脂糖與等體積50度水浴預溫的DMEM培養液（2×濃縮），混合，取3 ml 加到潔凈的載玻片上，鋪成薄層，室溫凝固后，放4℃，進一步凝固30~60分鐘，紅打孔器打孔。
2. 中性粒細胞制備：常規分離人外周血中性粒細胞。
3. 加樣：取10 ul 中性粒細胞懸液加入瓊脂板各組中心孔，分別取10 ul 待檢樣品及陽性對照品加入樣品孔，取10 ul DMEM培養液加入對照孔；將玻片置于濕盒內，37℃溫育2小時。
4. 染色：用甲醇溶液固定30分鐘，用瑞氏染液染片并干燥。
5. 檢測：顯微鏡下分別測量細胞從中心孔向樣品孔游走的距離（趨化游走距離）及向陽性對照孔的游走距離（自發游走距離），趨化活性以趨化指數表示。
6. 趨化指數=趨化游走距離/自發游走距離
注意事項
為確認待檢樣品中IL-8的特異性趨化效應，最好同時比較抗IL-8抗體與待測樣品作用后的趨化結果。