Leica生物顯微鏡——透射電鏡的使用

對于一名生物醫學工作者來說，徠卡生物顯微鏡是我們當今進行理論及臨床研究中不可缺少的重要工具。為了充分發揮它的功效，必須學會正確使用。

使用徠卡生物顯微鏡除了掌握必要的電鏡基本知識以外，在工作中還應注意下列環節。

1.保證透射電鏡各部分的對中。

徠卡生物顯微鏡所謂對中的標準就是要做到：（一）當放大倍數改變時，視場的中心不會丟失，（二）當改變物樣上的照明條件時，照明束不會失去均勻性或偏離中心；（三）對圖像進行調焦時，它不致偏離中心；（四）當功能開關從一種模式轉換到另一種模式時，物樣上的照明情況不受影響。要保證以廣各點，首先電鏡本身的設計制造當然府該是捐良的。其次對用戶來說，在每次使用前必須將儀器調整到zui佳狀況。

徠卡生物顯微鏡電鏡的對中包括：*，電子槍、聚光鏡以及中間鏡、投影鏡等相對于物鏡的對中。因為一臺電鏡出廠·時已保證物鏡光軸與電鏡的機械軸完全重臺，所以可把物鏡作為對中時的參考標準。第二*電鏡各級配備的電子束偏轉系統要對中合袖。第三，各級可動光闌（包括聚光鏡、物鏡、中間鏡的光闌）也要對中。誠然，般情況下各實驗室都有專門技術人員負責對電鏡的基本調整，以提供必要的工作條件。但是在使用過程中，有些對中情況不可避免地會遭到破壞或改變，因此研究人員必須能及時發現問題，并學會隨時加以調整。

2．特別重視各級透鏡尤其是物鏡的消像敬。

徠卡生物顯微鏡用低放大倍數檢查射到熒光屏的光斑時，如發現光斑偏離圓形。這說明存在聚光鏡的像散。在高放大倍數時它會導致zui大亮度的損失，并形成不對稱的照明孔徑角而影響成像質量。因此在調對中的同時，應該對聚光鏡消像散。

徠卡生物顯微鏡物鏡的消像散更為重要。由于像散的存在，不僅不能得到清晰的圖像，而且在高放大倍數的圖像中往往會出現一些細節假象。消像散的有效方法是在樣品支持膜上找到一個小孔，先將物鏡調于小量過焦狀態，再調節消像散器使膜孔周圍出現的黑邊達到處處寬度均勻。zui后再將物鏡調回至正聚焦。從事高分辨工作的科技工作者必須自己學會消像散。

3．學會正確選擇各項工作參量和工作模式。

徠卡生物顯微鏡電鏡中有許多參量是可供選擇的，例如電子槍的加速電壓、聚光鏡決定的基本束班尺度、各級透鏡的可動光闌孔徑等。電鏡工作者可根據實驗樣品的厚度、化學組成、原始襯度特性以及耐幅照程度等自由選用上述各物理量。

徠卡生物顯微鏡電鏡本身還可用于不同工作模式，如常規成像、低倍查樣、選區成像、選區衍射及高分辨衍射等。如果加上x射線能譜儀、電子能量損失譜儀、婦描顯示單元等附件，則它的工作模式將更多。使用者可根據自己的工作目的和要求加以選用，可兼而用之，也可在工作的不同階段重點使用不同模式。當代電鏡的重要待點就在于其多功能性，它集形態、結構和成分等分橋廣一體。因此我們應該密切注意科學技術發展的新趨勢，不斷拓寬自己的科技視野，充分利用當代各項實驗方法。

4．認真對待圖像記錄工作，力求能有高質量的圖片到手。

徠卡生物顯微鏡可以說電鏡工作的成果幾乎全部體現在所獲得的圖片上。因此在保證電鏡zui佳工作條件的前提下，電鏡工作者要十分重視圖像的拍攝，包括調焦、選擇放大倍數、調節襯度和曝光量等，還要防止照相過程中可熊遇到的機械振動和樣品漂移等。筆者認為電鏡工作者應該親自從事底片的沖擴，以保證獲得應有的實驗成果。

5．鉆研制樣技術，提高樣品質量。

徠卡生物顯微鏡制樣技術的優劣是電鏡工作成敗的關鍵。每個電鏡工作者必須不遺余力地鉆研并掌握這門技術。有關電鏡樣品的制備，請查本書有關章節。