實驗方法原理
實驗材料 成片 CEF 或 BHK-21 細胞改造的痘苗病毒
試劑、試劑盒 MEM-10 和 MEM-2.5 完全培養基
儀器、耗材 150 cm2 組織培養瓶CO2培養箱Sorvall 離心機250 ml 無菌離心瓶
實驗步驟
1. 用 1.5 ml 胰酶/EDTA 加 8.5 ml 的維持培養基消化 7 瓶 150 cm2 組織培養瓶培養的基本成片的 CEF 細胞或兩瓶 BHK-21 細胞（見「細胞培養實驗」基本方案 1 步驟 4～7），分裝于 20 個 150 cm2 組織培養瓶中。在加濕的 5% CO2 培養箱 37℃ 培養至接近單層成片的程度 (通常為 2 天/L 分別對 CEF 和 BHK-21 細胞進行 1:3 和 1:10 稀釋。用 BHK-21 細胞時，單層細胞密度應為 90%。
2. 移棄培養基并向每瓶中加入 30 ml MEM-2.5 完全培養基。
3. 溶解 MVA 病毒并在冰上超聲 30 s 以打散病毒（消化會降低病毒滴度）。
4. 按 1～3 個感染單位將病毒加入到培養基中，在 CO2 培養箱中于 37℃ 培養 3 天。
5. 用細胞刮或振搖將細胞刮下，將細胞和培養基轉移到 250 ml 離心瓶中。在 Sorvall RC-3B 離心機中 4℃，1200 g 離心 10 min， 棄上清。
6. 吹打或渦旋，使細胞重懸在 1 ml（每 150 cm2 組織培養瓶）MEM-2.5 完全培養基中。
7. 用反復凍融的方法裂解細胞懸液：用干冰/乙醇冷凍細胞，37℃ 水浴及渦旋解凍，如此進行 3 次。
8. 將存儲液在冰上超聲 1 min，隔 1 min 再超聲一次，然后分裝成 0.5 ml 的小份，凍存于 - 70℃。
注意事項
1. BHK-21 細胞應從 ATCC 獲得，從別的地方得到的細胞 MVA 病毒的復制水平也許會很低。
2. 150 cm2 組織培養瓶單層培養的 CEF 和 BHK-21 細胞數為（1～2）× 107。如果病毒量不夠則可少用或用小的培養瓶培養。