(4) 將1 ~ 2 μl RNA 上樣緩沖液加到乙二醛化的RNA 樣品中，然后馬上把RNA樣品加到凝膠加樣孔中，留著兩邊最外面的兩個孔不要加樣。將RNA 相對分子質量標準參照物加到最外面的孔中。
(5) 以5V/cm 的電壓進行電泳，直到溴酚藍遷移大約8 cm。
(6) 將凝膠放在保鮮膜上，在紫外燈下觀察RNA。把透明尺和凝膠對齊，在紫外燈下拍照。
(7) 在照片上量出從加樣孔到各RNA 條帶的距離。以RNA 片斷大小的對數（log10）值對遷移的距離作用。用得到的曲線計算點雜交檢測到的RNA 的大小。
(8) 利用半干轉印系統把RNA 固定在固體支持物上。
變性RNA的轉移和固定：
(1) 將凝膠轉移至培養皿中，用鋒利的刀片修去凝膠的無用部分，在凝膠的左上角切取一角作為標記。
(2) 將凝膠置于0.5×TBE中平衡30min。
(3) 用切紙刀裁一張長寬均大于膠1mm 的尼龍膜，切去膜一角，使其與凝膠的切角對應。
(4) 將尼龍膜和6 張與膠大小一致的濾紙置于0.5×TBE中平衡10min。
(5) 將3 張濾紙平鋪于電轉移裝置的金屬箔片上（陽極），用玻棒趕走所有氣泡。
(6) 將已平衡的尼龍膜平鋪于濾紙上，用玻棒趕走所有氣泡。
(7) 小心將凝膠置于尼龍莫上，并使兩者的切角相重疊，確保膠與膜之間沒有氣泡。
(8) 將另外3 張濾紙置于膠上，用玻棒趕走所有氣泡。
(9) 于最上層加入約15ml轉移緩沖液（0.5×TBE）以濕潤濾紙。
(10) 將支持框至于膠/膜/濾紙四周，接上陰極電極，蓋上安全蓋，接上電源供給裝置（確保電極插 頭連接正確），給予3mA/cm2 的恒流，轉移時間一般為30-35min（電轉過程中，電壓保持在20V左右，若超過25V，則須終止轉移）。
(11) 電轉結束后，用2×SSC 漂洗尼龍莫。
(12) 將尼龍莫置于一張干的濾紙上，在波長254nm 處按照0.120J/cm2 的劑量照射3min。
2. 雜交
1）試劑
DIG Easy Hyb
2）方法
(6) 將變性的DIG 標記的DNA 探針加入預熱的DIG Easy Hyb（3.5ml/100cm2膜）。小心
混勻，避免產生泡沫。
(7) 開泵排走預雜交液。
(8) 關泵，等到負壓消失，加入上述探針/雜交液，溫育至少6h。
開泵排走DNA 樣品溶液（注意：每次開泵應完全抽走薄膜上的試劑）。注：雜交溫度因
不同探針而異。
3. 洗脫
(1) 用2×SSC，0.1% SDS于15-25℃洗脫2次，每次5min。
(2) 用0.5×SSC，0.1% SDS 于65-68℃洗脫2 次，每次15min。
4. 顯色
1）材料
DIG-labeled 核苷酸
2）試劑
(1) Washing buffer: 0.1M Maleic acid, 0.15M NaCl; ph7.5 (20℃); 0.3% (v/v)Tween20
(2) Maleic acid buffer: 0.1 M Maleic acid, 0.15M NaCl; 用NaOH（固體）調節pH到7.5 (20℃)
(3) Detection buffer: 0.1M Tris-HCl, 0.1 M NaCl, ph9.5 (20℃)
(4) TE buffer: 10mM Tris-HCl; 1mM EDTA; pH 8.0
(5) Blocking stock solution: 用Maleic acid buffer 將Blocking reagent 稀釋為10%（w/v）
(6) Blocking solution: 用Maleic acid buffer 將10× Blocking reagent 稀釋為1×working solution
(7) Antibody solution:每次使用前將Anti-Digoxigenin-Ap, 10000rpm 離心5min, 用Blocking solution將Anti-Digoxigenin-AP 稀釋5000倍
(8) Color substrate solution: 于10ml Detection buffer 貯藏液中加入200μlNBT/BCIP(避光保存)
3）方法：
(1) 把雜交儀溫度調至25℃。
(2) 雜交后按嚴格的步驟洗脫后，用Washing buffer 簡單的清洗。
(3) 于100ml Blocking buffer 中保育30min。
(4) 在20ml Antibody solution 中保育30 min。
(5) 用100ml washing buffer 洗2*15min。
(6) 在20ml Detection buffer 中平衡2-5min。
(7) 在黑暗的合適的容器中，將膜于10ml 新鮮配制的Color substrate solution 中保育0.5h-16h (該過程不要搖動，可一段時間的暴露燈光下觀察染色情況)。
(8) 當所需的顏色呈現時，用50ml 滅菌的雙蒸水或TE-buffer沖洗膜。