實驗概要
Omega膠回收試劑盒中文說明書(E.Z.N.A. Gel Extraction Kit)。
主要試劑
1. 調節水浴的溫度為55-65°C。
2. 按下表用無水乙醇稀釋SPW Wash Buffer，并于室溫保存。
D2500-00，D2501-00: 加入20ml無水乙醇
D2500-01，D2501-01: 加入100ml無水乙醇
D2500-02，D2501-02: 每瓶中加入100ml無水乙醇
實驗步驟
1. 瓊脂糖凝膠電泳分離DNA片段，推薦使用新鮮的TAE/TBE Buffer和新配制的膠。
2. 片段完全分離后，在紫外燈下迅速切取所需條帶，DNA在紫外燈下爆光時間不超過30s。
3. 稱取凝膠塊的重量，按照每1g凝膠加入1ml Binding Buffer對應量，加入適量體積的Binding Buffer，55-60°C水浴至凝膠完全溶解(約7- 10min)。每隔2- 3min振蕩一次。
注意: 當Binding Buffer完全溶解凝膠后，請注意溶液顏色的變化。如果溶液顏色已經變成紫色或紅色，必須加入5ul 5M NaAc， pH5. 2至溶液中調整pH值。
4. 把HiBind DNA柱子套在2ml收集管。
5. 將DNA/凝膠混合液轉移至套在2ml收集管的HiBind DNA柱子中，10，000xg離心1 min。
6. 倒去濾液，把柱子裝回收集管中。HiBind柱一次能裝700ul溶液，若混合液超過700ul，每次轉移700ul至柱子中，然后重復5- 6步驟。
7. 把柱子重新裝回收集管，加入300ul Binding Buffer，按上述條件離心，棄去濾液。
8. 把柱子重新裝回收集管，加入700ul SPW Wash Buffer，按上述條件離心，棄去濾液。
注意：使用前SPW Wash Buffer必須用無水乙醇稀釋。
9. (可選)重復步驟8一次。
10. 棄去濾液，把柱子重新裝回收集管， 13，000xg離心空柱2min以甩干柱子基質。
11. 把柱子裝在干凈的1.5ml離心管上，加入30-50ul 65°C預熱的Elution Buffer到柱子基質上，室溫靜置2min。≥13，000xg離心2min洗脫出DNA。
