P1 噬菌體與 λ 噬菌體同年被發現（Bertani 1951)。兩種噬菌體在天然宿主中都是溫和噬菌體，它們在實驗室的研究歷程也幾乎相同。λ 噬菌體一經被發現，立刻就被當時有影響的實驗室選作分子水平研究溶原性噬菌體的模型。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。
| 實驗方法原理 | P1 噬菌體與 λ 噬菌體同年被發現（Bertani 1951)。兩種噬菌體在天然宿主中都是溫和噬菌體，它們在實驗室的研究歷程也幾乎相同。λ 噬菌體一經被發現，立刻就被當時有影響的實驗室選作分子水平研究溶原性噬菌體的模型。 |
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| 實驗材料 | 限制性內切核酸酶大腸桿菌菌株 |
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| 試劑、試劑盒 | 乙醇IPTG異丙醇酚氯仿聚乙二醇醋酸鈉DNA 分離液堿性裂解液TE |
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| 儀器、耗材 | 脈沖場凝膠LB 培養基TB 培養基Sorvall SS-34 轉頭或同類產品Corex 離心管65℃ 水浴箱 |
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| 實驗步驟 | 一、材料
1. 緩沖液及溶液
醋酸銨（0.5 mol/L)
乙醇
IPTG ( 1 mmol/L)
異丙醇
MgCl2 (1 mmol/L)
酚：氯仿（1:1，V/V）
聚乙二醇（40%, m/V，PEG8000 溶液）
醋酸鈉（0.3 mol/L，pH 5.2)
DNA 分離液
堿性裂解液Ⅰ
堿性裂解液Ⅱ
堿性裂解液Ⅲ
TE ( pH 8.0 )
含 20 μg/ml RNase 的 TE ( pH 8.0)
2. 酶與緩沖液
限制性內切核酸酶
3. 凝膠
脈沖場凝膠（或 0.5% 瓊脂糖凝膠）
4. 培養基
含 25 μg/ml 卡那霉素的 LB 培養基。
含 25 μg/ml 卡那霉素的 TB 培養基。
5. 離心機與轉頭
Sorvall SS-34 轉頭或同類產品。
6. 專用設備
Corex 離心管（30 ml)
65℃ 水浴箱
7. 載體與菌株
用非重組 P1 噬菌體或 PAC 載體轉化的大腸桿菌菌株（培養物）
用重組 P1 噬菌體或 PAC 載體轉化的大腸桿菌菌株（培養物）。
二、方法
重組 P1 或 PAC DNA 的制備
1. 分別在兩支 50 ml Falcon 試管或 Erlenmeyer 培養瓶中加入 10 ml 含有 25 μg/ml 卡那霉素的 TB。在一支試管中接種含有重組 P1 或 PAC 的單一菌落，另一支試管中則接種僅轉化空載體的菌落，37℃ 劇烈振搖 12~16 h，使培養物達到飽和。
2. 將培養物轉移到 15 ml 離心管中，4℃，3500 g ( Sorvall SS-34 轉頭，5400 r/min ) 離心 5 min, 收集細胞沉淀，用 3 ml 無菌水重新懸浮沉淀，再重復離心步驟。
3. 重懸沉淀于 2 ml 堿性裂解液Ⅰ中，并置于冰上。
4. 加入 3 ml 堿性裂解液Ⅱ，輕輕翻轉離心管幾次，混勻溶液，冰浴 10 min。
5. 向各管細胞懸液中加入 3 ml 冰預冷的堿性裂解液Ⅲ，輕輕翻轉試管數次，混勻溶液，放置于冰上 10 min。
6. 4℃，12000 g （Sorvall SS-34 轉頭，10000 r/min）離心 10 min，沉淀細胞碎片。
7. 轉移上清（約 7 ml ) 至 30 ml 的 Corex 離心管中，加入等體積的異丙醇，輕輕翻轉離心管數次以混勻溶液。4℃ 下，12000 g ( Sorvall SS-34 轉頭，10000 r/min ) 離心 10 min, 收集核酸沉淀。
8. 小心吸出上清，將離心管倒置于 Kimwipe 紙巾上，直至無液滴流出。用連接在真空泵的巴斯德吸管移去管壁上附著的液滴，加入 0.4 ml 0.3 mol/L 的乙酸鈉（pH 5.2) 溶解核酸沉淀。65℃ 短暫加熱幾分鐘，以助核酸溶解。
重組 P1 或 PAC DNA 的純化
9. 轉移 DNA 溶液至微量離心管。用等體積的酚：氯仿抽提一次。室溫條件下，在微型離心機上以最大速度離心 5 min, 分離水相與有機相。離心結束后，轉移上層水相至一新的微量離心管中。
10. 加入 1 ml 冰預冷的乙醇，翻轉離心管數次以混勻溶液。4℃ 下以最大速度離心 10 min 沉淀 DNA。用 0.5 ml 70% 乙醇洗滌沉淀，4℃ 再離心 2 min。
11. 小心移去上清，倒置離心管，室溫干燥至痕量乙醇揮發殆盡。向沉淀中加入 0.4 ml 含有 RNase 的 TE, 蓋好離心管，置于 37℃。在接下來的 15 min 內，間歇輕搖離心管，以助 DNA 的溶解。繼續溫育至 2 h。
12. 加入 4 μl 1 mol/L 的 MgCl2 和 200 μl 40% 的 PEG 溶液，混勻，4℃ 下以最大速度離心 15 min，收集 DNA 沉淀。
13. 吸去上清。將沉淀重懸于 0.5 ml 0.5 mol/L 的醋酸銨中，加入 1 ml 乙醇，翻轉離心管數次，混勻。4℃ 下以最大速度離心 15 min, 收集沉淀。
14. 再次吸去上清，用 0.5 ml 冰預冷的 70% 乙醇洗滌沉淀兩次。倒置離心管，室溫干燥至痕量乙醇揮發殆盡。重懸沉淀于 50 μl TE ( pH 8.0)。
15. 為進行限制酶分析，消化 5~15 μl ( 約 1 μg）重懸 DNA，用 0.5% 瓊脂糖凝膠電泳或脈沖場凝膠電泳分析產物。
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