實驗概要
本實驗介紹了PCR-ELISA的操作流程。PCR-ELISA是用免疫學方法檢測PCR產物，這比常規用電泳方法及Southern blot要簡便、省時，可同時處理大量標本，便于自動化。
實驗原理
PCR-ELISA的原理是在做PCR擴增時應用生物素(biotin)標記的引物，這樣PCR的產物就可結合到親和素(avidin)包被的塑料板上，再用地高辛標記的探針與PCR產物雜交，然后就可以用抗地高辛的酶聯反應檢測。
實驗步驟
1. PCR擴增
按基本PCR技術做DNA擴增，只是所用的引物至少有一個是5′端用生物素標記的。通常可在DNA合成儀上直接合成5′端帶生物素標記的引物。
2. 地高辛標記的探針雜交
將地高辛標記的DNA探針0.1μg稀釋于90μl 50mmol/L TrisHCl，pH8.3,80mmol/L KCl中。取10μl PCR產物加到管中，加熱至90℃，緩慢冷卻至67℃。離心1s，置52℃水浴保溫1h。
3. 將雜交產物固定到塑料板上
1) 可用商品供應的親和素包被的酶標板，亦可用普通酶標板按常規方法將親和素包被上；
2) 每孔加100μl封閉液(含10mg/ml BSA，1mg/ml魚精DNA的PBS)，室溫1h；
3) PBST洗3次；
4) 將地高辛探針雜交的PCR產物直接加到酶標板上，室溫孵育1h；
5) PBST洗3次。
4. ELISA檢測
1) 將抗地高辛抗體稀釋于PBS中，每孔加100μl，室溫孵育1h；
2) PBST洗3次；
3) 將酶標的第二抗體稀釋于PBS中，每孔加100μl，室溫孵育1h；
4) PBST洗3次；
5) 每孔加100μl酶底物，在顏色適合后終止反應；
6) 在酶標儀上讀結果。
注意事項
本法的敏感性可與放射性同位素標記相比，但又避免了同位素的危險。做大量樣品時，應統一配制反應液，再小心地分裝到各反應管中，以免污染，并使各管條件一致。非特異性反應常由于地高辛標記的DNA探針與酶標板直接結合所致，因此在封閉液中一定要包括足量的魚精DNA。
