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  • 發布時間:2020-06-15 19:52 原文鏈接: PPM植物組培抗菌保護劑使用說明

    產品名稱:PPMTM - Plant Preservative Mixture(植物組織培養抗菌保護劑)

    貨號:PPM

    保存條件:4o C

    運輸條件:常溫

    物理性質:溶液

    性狀無色至琥珀色透明液體

    pH3.8

    有效期見瓶身標簽說明

    產品描述:

    1.PPMTM 是一種熱穩定的抗菌劑,用于植物組織培養中植物的微生物污染防治與清除;

    2.在合理的使用劑量下,PPMTM是一種非常有效的植物組培抗菌劑與保護劑,不會對植物的生長(如種子萌發,愈傷增殖、再生等)產生任何影響,可視為培養基標準配方成份;

    3.PPMTM主要用于預防和消除來自空氣、水源或者人體接觸等外界因素導致的植物組培過程中的微生物污染,同時,對于植物內生菌也同樣具有非常好的抑制效果;

    4.PPMTM廣泛適用于絕大多數被子植物和裸子植物,但是不推薦用于蕨類植物、藻類等水生植物;

    5.PPMTM具有熱穩定性,能直接加入培養基高溫滅菌而不會影響使用效果,使用更加方便;

    6.PPMTM 相對于常規抗生素而言,性價比更高。

    作用機理

    PPMTM的活性成分能滲透細菌或者真菌細胞壁,抑制呼吸作用中三羧酸循環和電子傳遞鏈過程中關鍵酶的活性,同時,也能阻斷細菌和真菌吸收和利用培養基中單糖和氨基酸的過程,從而實現預防和清除植物組織培養過程中的微生物污染。

    相對抗生素的優勢:

    1.PPM TM能廣泛抑制和清除細菌和真菌的污染,并防止真菌孢子的萌發;

    2.PPM TM是通過抑制多種酶的活性而達到抑菌效果,從而能避免耐藥突變體的發生;

    3.PPM TM具有熱穩定性,無需過濾滅菌,能直接加入培養基高溫滅菌而不會影響使用效果,使用更加方便;

    4.PPM TM性價比更高,可更加廣泛的應用于更多的科學研究、作物育種、組培苗工廠化生產中。

    產品ZL說明:

    PPMTM - Plant Preservative Mixture是ZL產品,其商品名稱,配方及使用方法等都受ZL保護,ZL號5,750,402

    常規使用簡介:

    以下使用指南是針對大多數情況下的常規使用說明,特殊情況可做適當調整。

    消毒滅菌

    抑制農桿菌


    5.0% (see note)

    0.05%


    4 – 12 hours

    持續


    1. 將組織加入到含5%PPM?的3X MS*鹽溶液中,攪拌4-12小時;
    2. 處理過程中無需其他滅菌方法同時使用,不能添加酸堿試劑,調節pH,也不要加入Tween20等;

    3.處理完成以后將組織轉移到含0.05%PPM的培養基中;

    與其他抗生素配合使用效果更佳


    *說明:MS鹽溶液是泛指,如樣本的培養基鹽溶液不是MS鹽,以具體適用的培養基鹽溶液為準;

    操作說明:

    以下操作說明是針對大多數情況下的常規使用說明,必要時,可根據具體植物樣本情況進行適當調整,如需更多指導可聯系Dr. Assaf Guri at guri1@erols.com。

    1.常規用量:
    一般推薦使用使用濃度為0.05%-0.2%(1L培養基中加入0.5-0.75ml PPM?),愈傷增殖,器官形成,胚性組織發育等使用濃度為0.05%-0.075%。

    說明:
    (a) 含有PPM?的培養基無需在超凈工作臺中分裝,在培養基凝固以后將培養瓶/皿蓋子蓋  

    好即可。如使用自動灌裝系統,建議在灌裝前后將分裝管用高壓滅菌熱水處理;
    (b) 如果培養基儲存液保存在無菌容器中并未經污染的情況下,加入PPM?配制的培養基

    無需再次過濾或者高溫滅菌。如果是營養培養基,如含有200mg/L甚至更高濃度氨基酸或者蛋白質的培養基,建議過濾滅菌。

    2.植物內生菌污染處理

    (a) 種子:PPM?不推薦用于直接處理含有大量的細菌或真菌孢子的種子滅菌,對于種子離體萌發,建議先采用傳統方法消毒,然后置于含2-3%PPM?的全培養基礎鹽溶液中,輕輕攪拌4-12小時,此過程千萬不能添加Tween20和調節pH,處理完成以后直接插入含有PPM?(草本植物0.05-0.1%,木本植物0.2%)的培養基里;

    (b) 外植體:以25px外植體為例,將外植體置于含4-5%PPM?的全培養基礎鹽溶液中,輕輕攪拌4-12小時,此過程千萬不能添加Tween20和調節pH,處理完成以后直接插入含有PPM?(草本植物0.05-0.1%,木本植物0.2%)的培養基里;

    (c) 對于塊莖,球莖和鱗狀物的觀賞植物樣本:將其整體放入消毒劑中攪拌消毒處理以后,用水沖洗干凈,將材料切成薄片,置于含4-5%PPM?的全培養基礎鹽培養液中,輕輕攪拌4-12小時,此過程千萬不能添加Tween20和調節pH,處理完成以后無需沖洗直接插入含有0.1-0.2%的PPM?的培養基里進行培養。

    3.如果厚的外植體、污染嚴重的植株、種子等樣本經過以上處理仍得不到理想效果,可嘗試以下操作:

    (a) 將材料浸泡在水中持續攪拌處理(松軟組織攪拌1小時,硬實組織攪拌2小時);

    (b) 將材料在含50%的PPM?全培養基礎鹽溶液中攪拌處理5-10分鐘,此過程千萬不能添加Tween20和調節pH;

    (c) 無需沖洗,將處理過的材料直接加入到培養基中即可。對于真菌污染,可在培養基中加入適當濃度的PPM?。對于真菌細菌混合性污染,建議在培養的第一個月的培養基中加入0.05%-0.2%的PPM?。

    4.嚴重污染材料污染去除與搶救(重污染不超過一周):

    (a) 將污染的材料至于流水中用軟刷刷洗,然后置于含50% PPM?的無菌水溶液中攪拌5-15分鐘,對于細菌或者混合性污染,建議使用100% PPM?與0.6g/L的檸檬酸無菌水溶液按1:1混合的低pH(2.8-3.2)的酸性溶液處理;

    (b) 處理后的材料無需清洗,直接插入含0.05%-0.25的PPM?的培養基中培養至少一個月以上,其中前10天需要弱光培養;

    對于一些真菌、孢子和細菌污染隱藏較深,PPM?無法接觸到的部位,建議在初步的清洗以后,將材料切開,然后再放入含50% PPM?的無菌水溶液中攪拌5-15分鐘處理。

    5.農桿菌的去除:

    共培養以后,將樣本用無菌水清洗,然后將樣本浸沒在100% PPM?(補充4X的培養基鹽溶液)中處理2分鐘,取出后用無菌紙吸干后并置于常用抗性培養基中培養,3周后,更換到只含有0.05%-0.075% PPM?(無常用抗生素)的培養基中培養。

    使用注意事項

    1.在所有PPM?消毒處理外植體的過程中,盡量保證容器的體積足夠大,并使外植體材料所有面積與含PPM的處理溶液充分接觸,以保證消毒效果;

    2.如果外植體出現高度氧化現象,不要扔棄,大約50%的外植體在4-6周內即可恢復;

    3.50% PPM? 的處理溶液可以重復使用但是不推薦,因為使用次數和效果受外植體的體積與接種密度的影響。將50% PPM? 的處理溶液保存在4oC 可適當延長其活性,一般可使用不超過10次。如果必要,建議配制2份50% PPM? 溶液,一份用于外植體消毒內生菌污染,另一份用于消除“培養過程中”的輕度污染材料搶救,第二份溶液在每次處理過后需要用0.2mm濾器過濾;

    4.如果50% PPM? 溶液處理效果不理想,可采用100% PPM? 溶液進行處理,處理方法相同,但使用次數不得超過10次。

    安全說明:

    1.雖然PPM?是無毒性的,但是在使用過程中還需盡量避免直接與人體皮膚等直接接觸,建議使用時佩戴手套,保持空間空氣流通,如不慎吸入,先馬上因大量純凈水后立即就醫,如不慎入眼,立刻用大量水沖洗眼睛15分鐘,用肥皂清洗PPM?接觸過的皮膚部位;

    含PPM?的培養基垃圾處理與常規培養基處理方法相同。


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