QuEChERS法測定藥食同源性食品中16種真菌毒素

　　建立了加速溶劑萃取-QuEChERS-超高效液相色譜-串聯質譜測定藥食同源性食品中16種真菌毒素的方法。樣品經過加速溶劑萃取后用QuEChERS方法凈化，液相色譜分離，在正、負離子同時掃描和多反應離子監測模式下檢測，黃曲霉毒素B1和伏馬毒素B1采用內標法定量，其余毒素采用基質外標法定量。在較寬的線性范圍內，16種目標化合物的線性相關系數均大于0.99。該方法的檢出限為0.008~0.3 μg/kg，定量限為0.03~1.0 μg/kg，在3個不同添加水平下的加標回收率為70.8%~118%，RSD為2.5%~10.2%。采用建立的方法分別對市面上銷售的30個批次的山銀花、葛根和沙棘產品進行檢測，部分產品檢出不同含量的真菌毒素。該方法快速、靈敏，適用于藥食同源性食品中多種真菌毒素的同時檢測。

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　　樣品前處理

　　萃取

　　準確稱取粉碎過篩后的樣品5.00 g, 加入黃曲霉素B1同位素內標工作液和伏馬毒素B1同位素內標工作液各400 μL, 然后加入1 g氯化鈉, 并與適量硅藻土混勻后, 移入34 mL不銹鋼樣品萃取池中進行加速溶劑萃取。萃取試劑為乙腈-水-乙酸(85:12:3, v/v/v), 萃取溫度75 ℃, 加熱時間5 min, 靜態萃取時間5 min, 循環2次, 沖洗體積為60%萃取池體積, 萃取后氮氣吹掃100 s, 收集萃取液于60 mL收集瓶中。最后將萃取液轉移至雞心瓶中, 于45 ℃水浴中減壓濃縮至近干, 加入20 mL乙腈-水(85:15, v/v)充分溶解殘渣, 待凈化。

　　凈化

　　取上述待溶液5 mL于離心管中, 加入0.6 g -NH2、0.4 g PSA、0.25 g C18, 渦旋振蕩5 min。以10 000 r/min離心5 min, 吸取1 mL上清液于室溫氮吹至近干, 加入1 mL含0.1%(v/v)甲酸的乙腈-水(3:97, v/v)復溶, 過0.22 μm微孔濾膜, 待上機。

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　　分析條件

　　反相色譜柱:Kinetex XB-C18柱(100 mm×3 mm, 2.6 μm, 美國Phenomenex公司)； 柱溫:40 ℃； 流動相A為0.1%(v/v)甲酸水溶液(含5 mmol/L乙酸銨), B為0.1%(v/v)甲酸乙腈溶液； 流速:0.4 mL/min。梯度洗脫條件:0~0.5 min, 3%B； 0.5~1.0 min, 3%B~10%B； 1.0~6.0 min, 10%B~90%B； 6.0~7.5 min, 90%B； 7.5~7.6 min, 90%B~3%B； 7.6~9.0 min, 3%B。進樣體積:10 μL。

　　離子源:電噴霧電離(ESI)源, 采用正、負離子同時掃描模式； 噴嘴電壓:5 500 V(+)/-4 500 V(-)； 毛細管溫度:600 ℃； 氣簾氣壓力0.207 MPa； 碰撞氣電壓強度:medium。

　　結論

　　本文建立了一種基于ASE和QuEChERS聯用的前處理技術, 結合超高效液相色譜-串聯質譜同時檢測藥食同源性食品中16種真菌毒素的檢測方法。與傳統方法相比, 本方法減少了有機溶劑用量, 縮短了檢測周期, 提高了檢測靈敏度, 檢出限、定量限遠低于國家標準對真菌毒素限量檢測要求和歐盟、日本等國家規定的最大殘留量。方法學考察及實際樣品檢測證明, 該方法具有實用性強、靈敏度高、操作簡便快速等優點, 能夠滿足國內外對植物源性藥食同源產品中多種真菌毒素的檢測要求。