1、將制膠用具用70%乙醇沖洗一遍,晾干備用。
2、制膠:稱取0.5g瓊脂糖粉末,加入放有36.5mL的DEPC水(蒸餾水40ml)的錐形瓶中,加熱使瓊脂糖完全溶解。稍冷(60~70°)卻后加入5ml的10x電泳緩沖液、8.5(9)ml的甲醛(+0.5μl溴化乙錠)。然后在膠槽中灌制凝膠,插好梳子,水平放置待凝固后使用。
3、加樣:在一個潔凈的小離心管(DEPC處理過的500μl的)中混合以下試劑:電泳緩沖液(10x)2μl、甲醛3.5ml、甲酰胺10ml(μl)、RNA樣品3.5(4.5)μl。混勻,置60℃保溫10min,冰上速冷。加入3μl的上樣緩沖液(染料)混勻,取適量加樣于凝膠點樣孔內。同時點RNA標準樣品。
4、電泳:打開電泳儀(電泳槽內加入1XMOPS緩沖液),穩壓7.5V/cm(ml)電泳。
5、電泳結束后通過紫外透視儀觀察。