SDS法提取植物基因組DNA

本方法由Dellaporta,Wood和Hicks(1983)的方法修改而成。其基本原理是研磨的組織細胞用熱的SDS裂解后，加入高濃度的KAc，0℃放置以除去蛋白和多糖類雜質，最后用乙醇或異丙醇沉淀。

一 材料、試劑和儀器

1 材料 新鮮的組織材料或-80℃凍存的材料

2 試劑

(1)提取緩沖液

Tris-HCl 100mmol/L（pH8.0）

EDTA 50mmol/L （pH8.0）

NaCl 500 mmol/L

滅菌后加β-巰基乙醇至10 mmol/L

(2)裂解液20%SDS

(3)高鹽溶液5mol/L KAc

(4) RNaseA 10mg/ml

(5) 異丙醇

(6)滅菌ddH2O或TE

3. 儀器: 離心機， 恒溫水浴, 臺式高速離心機，電泳裝置

二 實驗程序

1取幼嫩的組織材料1-2g,用蒸餾水沖洗干凈，再用滅菌ddH2O沖洗2次，放入經液氮預冷的研缽中，加入液氮研磨至粉末狀，用干凈的滅菌不銹鋼勺轉移粉末到加有500μL提取液的離心管中,輕輕混勻。

2 向管中加入50μL20%SDS溶液，混勻，不可過于強烈震蕩以防基因組DNA斷裂 ，65℃保溫10min，并不時搖動。

3 加入150μL 5mol/L KAc，混勻，置冰上20-30 min。

4 4℃,15 000rpm離心15min,轉移上清到另一離心管中，加入0.7V的異丙醇，混勻，-20℃沉淀30 min 。

5 12 000rpm離心10min回收基因組DNA沉淀，吹干后加入適量的滅菌ddH2O或TE溶解DNA。

6 加入1/10體積的RNaseA，37℃保溫20min，除去RNA。

7 CI抽提后，加2V乙醇，-20℃沉淀30 min 。12 000rpm離心10min回收基因組DNA沉淀。

8 用400μL 70%乙醇洗一次后，吹干，加入適量的滅菌ddH2 O或TE溶解DNA。

9 電泳檢測完整性。