哈嘍，小伙伴們！走過不要錯過，又到了科普知識的時間了，喜歡做分子實驗的小伙伴一定聽說過Southern blot這門檢測技術，但大家知道為什么叫Southern嗎？今天小編就為大家科普一下這門實驗技術。
Southern Blot是最早出現的blot（印跡）技術，它是檢測DNA的一種方法。這項技術之所以被命名為“Southern”，主要是因為此技術在20世紀70年代由一位叫Edwin Southern的英國生物學家（見圖1）發明，科學界為紀念該技術的誕生便以發明者的名字來命名，即Southern Blot[1]。
Southern blot 實驗原理及步驟?
了解了Southern 的由來，接下來小編帶大家一起學習Southern blot實驗原理及步驟。
Southern blot基本原理：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補的原則特異性地雜交形成雙鏈。其操作過程是利用特定酶將DNA消化成片段，再進行電泳分離，然后將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上，經干烤或者紫外線照射固定，再與相對應結構的DIG標記探針進行雜交，用放射自顯影或酶反應顯色，從而檢測特定DNA片段分子的含量（見圖2）[2]。
blot 操作過程[2]
Southern blot
檢測技術在模式動物制備中的應用?
雖然距離這項技術發明已經過去很多年，但這項檢測技術仍被廣泛的應用在各種生物實驗研究中。
如下圖所示，為了鑒定攜帶條件性Satb1等位基因的供體質粒通過同源重組方式整合到小鼠的Satb1特異性位點上（見圖3a），研究者們提取供體小鼠與wild小鼠肝臟基因組DNA，經限制性內切酶Eco RV (b) or Spe I (c,d)酶切，同時選擇用于Southern印跡分析的DNA探針。探針位于待靶向的基因中，但在靶向載體外部設計5’與3’外源探針（5’ external probe與3’external probe）以及內源eGFP探針（GFP internal probe）。通過Southern blot檢測顯示，5’與3’外源探針分別與酶切后對應基因組片段發生雜交，說明供體質粒在5’與3’端與靶基因組同源重組（見圖3b，d），與預期插入位置一致；經內源eGFP探針雜交顯示為一條帶，說明條件性Satb1等位基因以單拷貝插入到靶基因座上（見圖3c）。[3]
圖3. Southern blot分析鑒定供體質粒靶向小鼠Satb1 基因座及拷貝數[3]
那么既然說是同源重組“事件”，對于“事件”肯定有很多不確定性。如圖4A所示，5’與3’同源臂均發生同源重組后，可將靶載體正確的插入到目的基因組中，獲得研究所需的目的片段。當然，有的時候也會出現異常情況（見圖4B），比如同源重組僅發生在5’末端，但3’末端沒有發生同源重組，而是直接被插入至基因組中。在這種情況下，5’外源探針顯示靶向等位基因片段符合預期，但3’端顯示為野生型片段。此時，如果不通過設計同源臂外兩側DNA探針策略來驗證同源重組是否正確，這很大程度上會增加后續研究的風險性。[4]