T7RNA聚合酶系統基因表達實驗（二）

OST7-1 細胞來源于鼠 L929 細胞，能在細胞質中持續表達噬菌體 T7 RNA 聚合酶，因此，應用此細胞系無需用 vTF7-3 感染細胞。

貼壁培養的單層 OST7-1 細胞含有 pT7 控制的外源基因的重組病毒儲液

完全 MEM-2.5 培養基完全MEM-10培養基（含有 400 μg ml Geneticin）胰酶（2 × 結晶無鹽 過濾除菌后凍存于 -20℃）

過濾除菌后凍存于 -20℃

1. 用含有 400 μg/ml G418 的完全 MEM-10 培養基以 1 × 10⁶ 個 OST7-1 細胞/孔加入 6 孔組織培養板培養，直至細胞匯片生長（一般過夜）。

含有 G418 的完全 MEM-10 培養基用于維持細胞培養，但 G418 在表達實驗中并不需要。

2. 混合等體積的病毒儲液（10 pfu/細胞）和 0.25 mg/ml 胰酶，渦旋混勻。溫育 30 min，每隔 5～10 min 晃動一次。

3. 將胰酶處理后的病毒用 MEM-2.5 培養基稀釋至 2×10⁷ pfu/ml。

4. 用 0.5 ml 的病毒混合液感染 6 孔板中每孔匯片生長的 OST7-1 細胞，溫育 1～2 h, 每隔 15～30 min 晃動一次。

5. 每孔加入 1.5 ml 完全 MEM-2.5 培養基，繼續培養。

6. 感染 3～24 h 后，分析細胞（見「兩種重組痘苗病毒共感染細胞」步驟 1.6 的注解）。

1. 所有培養都在加濕的 37℃ 5% CO₂ 培養箱中培養，除非有特殊說明。

2. 與活細胞接觸的器械和試劑都應該是無菌的，操作也必須無菌。