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  • 發布時間:2020-07-07 14:30 原文鏈接: Vero細胞在WAVE反應器中的微載體球轉球放大(三)

    圖 3 和圖 4 顯示的是球轉球前后 Vero 細胞在微載體上的生長情況,分別有接種前第一、第三和第五天細胞的形態。圖 4 的上面三張小圖顯示了球轉球實驗 B2B #3 之前來自細胞工廠種子培養的細胞生長形態。這是典型的 Vero 細胞種子培養的生長情況。通常 90%以上的 Vero細胞會在接種 4 小時之內貼到微載體上并在 24 小時內進入對數生長期。從圖 3 和圖 4 中各次球轉球實驗之后 Vero 細胞在微載體上的生長情況,可以看到球轉球實驗之后細胞保持有良好的和種子細胞培養相似的生長形態。

    圖 3.球轉球實驗 B2B #1和B2B #2后 Vero細胞在微載體上的生長情況

    圖4.球轉球實驗B2B #3前后 Vero細胞在微載體上的生長情況

     

        在細胞培養袋中進行的高倍率放大

        我們通過兩種方式嘗試把球轉球放大工藝的放大倍率提升到十倍。第一種是用 6 g/L 的微載體密度培養 Vero 細胞至 4x106/毫升左右的細胞密度。球轉球以后以十倍的放大倍數(培養體積放大,微載體表面積放大,或者兩者兼具)開始新一輪的培養。第二種是如上以 3g/L 的微載體密度培養,待細胞密度接近 3x106

    時,進行球轉球實驗,并采用培養體積和微載體表面積均為十倍的放大倍率。為彌補起始細胞密度過低可能會帶來的生長緩慢,我們嘗試在球轉球之后用較少的培養體積培養。待細胞數增長到一定程度時,再添補新的培養基到需要的體積。觀察球轉球前后的細胞生長情況。

     

        B2B  #4 采用第一種方式進行高倍率放大,即用 6g/L 的微載體密度培養 Vero細胞至細胞密度 4.3x106/毫升,培養體積為 2 升。用胰酶把 Vero 細胞從微載體上消化下來。取十分之一的細胞/微載體懸浮液接種到新的 2 升的培養體積中,微載體濃度為 6g/L,這樣培養體積及微載體表面積的放大倍數均是十倍。作為平行比較試驗,取十分之一的細胞/微載體懸浮液接種到另一個 2 升的培養體積中,微載體濃度 3 g/L,如此培養體積放大十倍,微載體表面積放大五倍。兩個培養同時進行,觀察細胞生長的情況。

    圖5.球轉球實驗B2B #4前后細胞生長曲線

     

        圖 5顯示的是球轉球實驗B2B  #4前后細胞生長曲線。有意思的是球轉球以后的兩個平行培養中細胞增長速度基本相似,雖然其微載體密度相差了一倍。它們比種子培養多用了 1-2 天達到相似的細胞密度。這應該是球轉球之后培養的起始細胞密度相對較低所致,但細胞倍增速度并不低。球轉球之后兩個培養前四天的細胞倍增速度均是 0.57 d-1,而種子培養前四天的細胞倍增速度是 0.54 d-1。

     

        圖 6 顯示的是球轉球實驗 B2B  #4 前后 Vero 細胞在微載體上的生長情況。可以看到球轉球之后的培養雖然起始細胞數較少,但細胞貼壁和存活情況仍然不錯。在其后的幾天中細胞生長的形態也很穩定和良好。雖然在最初幾天看似細胞在微載體上分布不均勻,但細胞增殖正常并在其后幾天迅速布滿所有的微載體。

    圖6.球轉球實驗B2B #4前后 Vero細胞在微載體上的生長情況


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